Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 深红色荧光

Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 *深红色荧光,适合微孔板检测*是通过检测PS的翻转来测定细胞凋亡。在凋亡细胞中，PS从胞内移位到胞外表面，因此PS出现在细胞的外表面可以作为细胞凋亡的起始或者中间阶段的通用指示器，也可以通过其形态学改变来测定。该试剂盒使用我们独有的深红色荧光Apopxin PS传感器特异性的结合PS，其亲和性高于Annexin V(Kd<10nM)。该试剂盒使用的PS传感器结合膜上的PS后，发出深红色的荧光。因为与PS的高亲和性，该试剂盒比其它基于Annexin-V，仅能用荧光显微镜和流式检测凋亡的试剂盒更稳定，并且本试剂盒除上述两种仪器外还能使用荧光酶标仪。

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荧光酶标仪
Ex:	650 nm
Em：	680 nm
Cutoff：	665 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	底读模式

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
2.加入等量的Apopxin™深红色工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.在Ex / Em = 650/680 nm（截止= 665 nm）或使用Cy5滤光片的荧光显微镜下监控荧光强度（底部读取模式）

 

溶液配制

工作溶液配制

将10μLApopxin™深红色（组分A）添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Apopxin™深红色工作溶液。

 

操作步骤

1.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10X /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的10X测试化合物储备溶液来处理细胞。 对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO2、37°C的培养箱中孵育所需的时间（对于喜树碱处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导凋亡。

3.在每个孔中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Apopxin™深红色工作溶液。

4.在避光条件下，于室温下孵育细胞板至少1小时。

5.以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非贴壁细胞）2分钟（制动）。

6.使用荧光酶标仪（Ext / Em = 650/680 nm（截止= 665 nm））或使用带有Cy5®滤光片的荧光显微镜对图像池进行荧光强度监测。

 

图示

图1.用Cell Meter™磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒染色的Costar黑壁/透明底部96孔板中Jurkat细胞的荧光图像。 不使用（左）或用20μM喜树碱（右）处理Jurkat细胞5小时。 使用具有通道的荧光显微镜测量荧光强度。

参考文献

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