Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）

Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体，细胞核等。活细胞区的选择性标记为研究空间细胞事件提供了一种强大的方法。

该特定试剂盒设计用于标记蓝色荧光中固定细胞的F-肌动蛋白。该试剂盒使用蓝色荧光鬼笔环肽缀合物，其选择性结合F-肌动蛋白。 鬼笔环肽缀合物具有Ex / Em = 350 / 450nm，与大多数荧光显微镜附带的DAPI滤光片组相容。 它是一种高亲和力探针，用于标记，鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片，细胞培养或无细胞实验中的F-肌动蛋白。Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒是由美国AAT Bioquest 研发的。

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荧光显微镜
Ex:	350 nm
Em：	450nm
推荐孔板:	黑色透明底板
推荐通道:	DAPI 通道

分析方案

概述

准备样品（微孔板孔）

从板上取下液体加入100μL/孔的iFluor 350-Phalloidin溶液

在室温下染色细胞15到60分钟

洗涤细胞

在Ex / Em = 350 / 450nm下在显微镜下观察样品

 

操作方法

1.准备1X iFluor 350-鬼笔环肽工作溶液：

将10μL的iFluor 350-鬼笔环肽（组分A）加入10mL标记缓冲液（组分B）中。

注1：未使用的iFluor 350-鬼笔环肽原液（组分A）应等分并保存在-20℃，避光。

注2：不同的细胞类型可能染色不同。应相应地制备iFluor 350-鬼笔环肽工作溶液的浓度。

 

2.染色细胞：

2.1执行甲醛固定。在室温下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育细胞10-30分钟。

注意：避免使用任何含甲醇的固定剂，因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS冲洗固定的细胞2-3次。

2.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞（步骤2.2）3至5分钟，以增加渗透性。用PBS冲洗细胞2-3次。

2.4将100μL/孔（96孔板）的1X iFluor™350-鬼笔环肽工作溶液（来自步骤1）加入固定的细胞（来自步骤2.2或2.3），并在室温下染色细胞15至60分钟。

2.5用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以去除多余的染料，然后使用DAPI通道进行板密封和成像。

 

图1.用甲醛固定并用Cell Navigator F-肌动蛋白标记试剂盒染色的CPA细胞的图像*在Costar黑色96孔板中的蓝色荧光* A：用1X iFluor 350-鬼笔环肽标记细胞仅30分钟。 B：用鬼笔环肽处理细胞10分钟，然后用1X iFluor 350-鬼笔环肽染色30分钟。

 

试剂应用文献

Mussel-inspired conductive nanofibrous membranes repair myocardial infarction by enhancing cardiac function and revascularization

Authors: Yutong He, Genlan Ye, Chen Song, Chuangkun Li, Weirong Xiong, Lei Yu, Xiaozhong Qiu, Leyu Wang
Journal: Theranostics. 2018; 8(18): 5159–5177.

 

参考文献

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Journal: RSC Advances (2017): 34508--34516

Preparation, characterization and in vitro cell performance of anti-washout calcium phosphate cement modified by sodium polyacrylate
Authors: Xingmei Li, Fupo He, Jiandong Ye
Journal: RSC Advances (2017): 32842--32849

miR-29b-Loaded Gold Nanoparticles Targeting to the Endoplasmic Reticulum for Synergistic Promotion of Osteogenic Differentiation
Authors: Ting Pan, Wenjing Song, Huichang Gao, Tianjie Li, Xiaodong Cao, Shizhen Zhong, Yingjun Wang
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Osteogenic and tenogenic induction of hBMSCs by integrated nanofibrous scaffold with chemical and structural mimic to bone-ligament connection
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The stimulation of the differentiation of pheochromocytoma (PC12-L) cells into neuron-like cells by electrically conductive nanofibre mesh
Authors: Huishang Yang, Guanglin Zhu, Yicheng Huang, Xuetao Shi, Yingjun Wang
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Distinct mechanical behavior of HEK293 cells in adherent and suspended states
Authors: Seyed Mohammad Ali Haghparast, Takanori Kihara, Jun Miyake
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The preparation and characterization of polycaprolactone/graphene oxide biocomposite nanofiber scaffolds and their application for directing cell behaviors
Authors: Juqing Song, Huichang Gao, Guanglin Zhu, Xiaodong Cao, Xuetao Shi, Yingjun Wang
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Actin-based biomechanical features of suspended normal and cancer cells
Authors: Seyed Mohammad Ali Haghparast, Takanori Kihara, Yuji Shimizu, Shunsuke Yuba, Jun Miyake
Journal: Journal of bioscience and bioengineering (2013): 380--385

 

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