Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）

Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒是一套荧光工具，用于标记亚细胞细胞器，如膜，溶酶体，线粒体和细胞核等。活细胞区的选择性标记提供了一种研究空间细胞事件的有效方法。

该特定试剂盒用于标记橙色荧光中固定细胞的F-肌动蛋白。该试剂盒使用橙色荧光鬼笔环肽缀合物，其选择性结合F-肌动蛋白。橙色荧光鬼笔环肽缀合物具有Ex / Em = 550 / 575nm。 缀合物对荧光成像也具有良好的光稳定性。 它是一种高亲和力探针，用于标记，鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片，细胞培养或无细胞实验中的F-肌动蛋白。Cell Navigator F-肌动蛋白（F-Actin）标记试剂盒是美国AAT Bioquest 研发的产品。

---

荧光显微镜
Ex:	TRITC 滤波片组
Em：	TRITC 滤波片组
推荐孔板:	黑色透明底板

样品分析 

概述

准备样品（微孔板孔）从板上取下液体

加入100μL/孔的iFluor 546-鬼笔环肽溶液

在室温下染色细胞15到60分钟洗涤细胞

使用TRITC通道在显微镜下观察样品（Ex / Em = 550/575 nm）

注意：打开前将所有组件加热至室温

 

操作步骤

1.准备1X iFluor 546-鬼笔环肽工作溶液：

将10μL的iFluor 546-鬼笔环肽（组分A）加入10mL标记缓冲液（组分B）中。

注意1：未使用的1X iFluor 546-鬼笔环肽原液应等分并保存在-20 ℃，避光。

注意2：不同的细胞类型可能染色不同。 应相应地制备iFluor 546-鬼笔环肽工作溶液的浓度。

 

2.染色细胞：

2.1执行甲醛固定。 在室温下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育细胞10-30分钟。

注意：避免使用任何含甲醇的固定剂，因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。 优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS冲洗固定的细胞2-3次。

2.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞（步骤2.2）3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。

2.4将100μL/孔（96孔板）的iFluor 546-鬼笔环肽工作溶液（来自步骤1）加入固定的细胞（来自步骤2.2或2.3），并在室温下将细胞染色15至60分钟。

2.5用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以去除多余的染料，然后使用TRITC通道进行板密封和成像。

 

        图1.用甲醛固定并用Cell Navigator F-肌动蛋白标记试剂盒染色的CPA细胞的图像*在Costar黑色96孔板中的橙色荧光* A：用1X iFluor 546-鬼笔环肽标记细胞仅30分钟。 B：用鬼笔环肽处理细胞10分钟，然后用1X iFluor 546-鬼笔环肽染色30分钟。

 

试剂应用文献

Mussel-inspired conductive nanofibrous membranes repair myocardial infarction by enhancing cardiac function and revascularization

Authors: Yutong He, Genlan Ye, Chen Song, Chuangkun Li, Weirong Xiong, Lei Yu, Xiaozhong Qiu, Leyu Wang
Journal: Theranostics. 2018; 8(18): 5159–5177.

 

参考文献

Porous Li-containing biphasic calcium phosphate scaffolds fabricated by three-dimensional plotting for bone repair
Authors: Xiaoheng Guo, Huichang Gao, Xiao Liu, Jingjing Diao, Xuetao Shi, Naru Zhao, Yingjun Wang
Journal: RSC Advances (2017): 34508--34516

Preparation, characterization and in vitro cell performance of anti-washout calcium phosphate cement modified by sodium polyacrylate
Authors: Xingmei Li, Fupo He, Jiandong Ye
Journal: RSC Advances (2017): 32842--32849

miR-29b-Loaded Gold Nanoparticles Targeting to the Endoplasmic Reticulum for Synergistic Promotion of Osteogenic Differentiation
Authors: Ting Pan, Wenjing Song, Huichang Gao, Tianjie Li, Xiaodong Cao, Shizhen Zhong, Yingjun Wang
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2016): 19217--19227

Osteogenic and tenogenic induction of hBMSCs by integrated nanofibrous scaffold with chemical and structural mimic to bone-ligament connection
Authors: Zifeng Lin, Xiujuan Zhao, Si Chen, Chang Du
Journal: Journal of Materials Chemistry B (2016)

The stimulation of the differentiation of pheochromocytoma (PC12-L) cells into neuron-like cells by electrically conductive nanofibre mesh
Authors: Huishang Yang, Guanglin Zhu, Yicheng Huang, Xuetao Shi, Yingjun Wang
Journal: Applied Materials Today (2016): 215--222

Distinct mechanical behavior of HEK293 cells in adherent and suspended states
Authors: Seyed Mohammad Ali Haghparast, Takanori Kihara, Jun Miyake
Journal: PeerJ (2015): e1131

The preparation and characterization of polycaprolactone/graphene oxide biocomposite nanofiber scaffolds and their application for directing cell behaviors
Authors: Juqing Song, Huichang Gao, Guanglin Zhu, Xiaodong Cao, Xuetao Shi, Yingjun Wang
Journal: Carbon (2015): 1039--1050

Actin-based biomechanical features of suspended normal and cancer cells
Authors: Seyed Mohammad Ali Haghparast, Takanori Kihara, Yuji Shimizu, Shunsuke Yuba, Jun Miyake
Journal: Journal of bioscience and bioengineering (2013): 380--385