Human t-Plasminogen Activator/

Human t-Plasminogen Activator/tPA  ELISA Kit

目录号：VAL171
适用于定量检测天然和重组人 t-Plasminogen Activator/tPA 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
组织纤溶酶原激活剂（tPA），又称PLAT，是一种64-69kda的胞外糖蛋白，属于丝
氨酸蛋白酶的肽酶S1家族。tPA的生物学效应包括血块降解、血管重塑、突触可塑性和
脑损伤后的神经退化。人tPA是一种有530 aa的单链多肽（36-562 aa），含有一个氨基末
端纤维蛋白“指状”结构域，一个表皮生长因子结构域，两个环状结构域和一个c端丝
氨酸蛋白酶催化结构域(1,2)。部分活性单链tPA通过纤溶酶、激肽释放酶/KLKB1和凝
血因子X/Xa在Arg310-Ile311之间切割，生成成熟的双链二硫键连接多肽。这种成熟形式
的tPA的催化活性是单链的10倍（3，4）。从氨基酸36-562中，人tPA与小鼠和大鼠tPA
分别具有81%和72%的同源性。
人tPA由成纤维细胞、血管内皮细胞、黑色素瘤细胞和神经细胞合成和分泌（5）。
tPA的生物活性受到严格控制；自由循环的tPA被丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin I1和Serpin
E1/PAI-1隔离（6）。tPA的生物活性受到严格控制；自由循环的tPA被丝氨酸蛋白酶抑
制剂Serpin I1和Serpin E1/PAI-1隔离（6）。tPA也通过低密度脂蛋白受体相关蛋白-1
介导的内吞作用从细胞外和血管空间快速清除（7，8）。
在血管中，循环的tPA会结合血栓的形成。在这里，tPA将其主要底物纤溶酶原转化
为纤溶酶，一种随后降解凝块纤维蛋白基质的酶(9,10)。tPA表达或活性的增加与出血
过多有关，而tPA活性的降低与血栓和栓塞的形成有关。在大脑中，tPA在神经元、星形
胶质细胞、小胶质细胞和血管实质内皮细胞中表达（5、11）。脑卒中、缺氧、兴奋性
损伤和应激性认知能力下降均显示了tPA表达发生的变化(5,12,13)。tPA的蛋白水解活
性针对脑细胞外基质（ECM）中的蛋白质。tPA介导的ECM分解参与促进突触可塑性，
包括神经突增生和突触重塑（14）。除蛋白水解功能外，tPA还具有许多关键的非蛋白
水解功能，包括激活小胶质细胞和调节神经传递（5、15、16）。tPA还参与血管生成
和血脑屏障的破坏（17-20）。

A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人tPA抗体包被于微孔板上，样品和标准品中
的人tPA会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗人tPA
检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶
（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。

B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人tPA，测定其回收率。回收率范围在
98.5-126.6%，平均回收率在112.2%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人tPA，测定其回收率。回收率范围在
86.6-114.0%，平均回收率在102.2%。
C. 灵敏度
人tPA的最低可测剂量（MDD）一般小于6.09 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的CHO表达的高纯度重组人tPA蛋白所校正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的人tPA，然后用标准品稀释液（1×）将样本稀释到检
测范围内，测定其线性。

G. 特异性
将以下因子配制成50 ng/mL的浓度来检测没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant human Natural protein
Annexin A2 human Fibronectin
Coagulation Factor Xa
LRP-1
LRP-1B
Plasminogen
Serpin A5
Serpin E1
u-Plasminogen Activator