Human Proprotein Convertase 9/

Human Proprotein Convertase 9/PCSK9 Valukine ELISA Kit

适用于定量检测天然和重组人 Proprotein Convertase 9/PCSK9 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

I. 背景
前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin9型(PCSK9)，又名神经细胞凋亡调节转化酶1
(NARC-1)，是枯草杆菌蛋白酶相关丝氨酸内切蛋白酶的蛋白酶K亚家族成员。该蛋白全
长有692个氨基酸，包括一个信号肽、一个前结构域和一个催化结构域。PCSK9在肝脏、
肠道和肾脏中呈高表达。它最初是作为一种74 kDa的可溶性前体蛋白合成的。在内质网
中，它经过自催化的分子内裂解，生成一个14 kDa的前结构域和一个60 kDa的催化结
构域。当PCSK9在细胞外分泌时，这两个区域仍然相关(1-3)。
PCSK9的主要生理功能是介导低密度脂蛋白受体(LDL R)的降解。早期观察表明，
PCSK9基因功能获得性错义突变可导致常染色体显性的高胆固醇血症(4, 5)。PCSK9的
表达被观察到被固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)上调，SREBPs是一个转录因子家族，
负责上调与胆固醇和脂肪酸代谢有关的基因，例如LDL R基因(6, 7)。进一步的实验证据
表明，小鼠敲除PCSK9基因后，肝细胞中的LDL R数量增加，而当PCSK9过表达时，
肝脏中的LDL R蛋白数量减少(8, 9)。在人类中，基因分析表明，PCSK9基因中无意义
或功能缺失突变的个体血浆LDL胆固醇水平显著降低(10, 11)。这些研究清楚地表明，
PCSK9在降低肝脏LDL R水平中起关键作用。最近，潜在的机制已经被揭示：在正常的
生理条件下，LDL R在细胞表面内化，并被导向核内体，以便被循环回到细胞表面。
PCSK9与LDL R的EGF域结合，阻止LDL R被分入核内体。相反，PCSK9 /LDL R复合
物重新分配到溶酶体进行降解(12-14)。因此，PCSK9调节循环中LDL R的数量，并调
节胆固醇水平。已发现血清PCSK9浓度与胆固醇水平直接相关(15, 16)。

II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人PCSK9抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的人PCSK9会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的
抗人PCSK9检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣
根过氧化物酶(streptavidin-HRP)孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液
（显色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 193.1 1124.7 4357.8 195.3 1152.7 4443.9
标准差 6.9 28.9 96.0 7.4 56.0 165.5
CV% 3.6 2.6 2.2 3.8 4.9 3.7
B. 回收率
在细胞上清样本中掺入检测范围内不同水平的人PCSK9，测定其回收率。回收率范围
在86.8-108.3%，平均回收率在100.3%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人PCSK9，测定其回收率。回收率范围在
100.2-120.0%，平均回收率在113.3%。
C. 灵敏度
人PCSK9的最低可测剂量（MDD）一般小于0.57 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的NS0表达的高纯度重组人 PCSK9蛋白所校
正。