- ￥600
- 烜雅生物
- XY-ZL0232
- 国产
- 2026年01月20日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
150
- 英文名：
JM109 Chemically Competent Cell
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻存管
英文名称：JM109 Chemically Competent Cell
形式：冻存管
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，氯化钠：10.0，琼脂：15.0，pH：7.0±0.2（25℃）
生长条件：37℃；18-24h；好氧
存储条件：-80℃
安全等级：1
操作步骤：
1. 感受态细胞放置冰中融化 (或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅 速插入冰中) ，加入目的 DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。
2.42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基LB，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少17h。
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短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克
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