- ￥700
- 烜雅生物
- XY-ZL0141
- 国产
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
155
- 英文名：
pET-21d
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pET-21d
形式：质粒干粉
参考用途：载体宿主：大肠杆菌，载体用途：蛋白表达，基因种属：空载体，基因类型：ORF，原核抗性：Amp，荧光蛋白：未知。
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α）
存储条件：2-8℃
安全等级：0
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验（ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner
中，现在Invitrogen已经克服了这个问题。在载体上多加四个碱基GTGG，就是这四个碱基使它可以与PCR产物定向连接。其作用机理见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D-TOPO®、pET101/D-TOPO®、pET102/D-TOPO®、pET151/D-TOPO®和pET200/D-TOPO®，这五个载体根据所带的标记、是否具有蛋白酶切位点而各有不同。详细信息参见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D
真DNA聚合酶可能会导致此问题。大肠杆菌 BL21（DE3）中的蛋白质表达重组pET-32α（+）载体可以表达所需的蛋白质，其在被异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后与大肠杆菌 BL21（DE3）中的109aa Trx•Tag TM融合。首先，将含有100μg/ ml氨苄青霉素的10ml LB培养基与含有重组pET-32α（+）载体的新鲜细菌菌落一起接种37℃过夜; 然后，将500-μl过夜培养物加入到含有100-μg/ ml氨苄青霉素的30-ml新鲜LB培养基中，在37℃接种直至OD 600
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