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- Xybio
- 上海
- P1205
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#26908;Acetamidase Promoter
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pLAM12乙酰胺酶启动子质粒
别称: Plasmid#26908;Acetamidase Promoter
启动子：Acetamidase
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒;其它基因质粒;其它种源质粒
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
备注: 高拷贝质粒
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：
基因种属：
基因类型：Promoter
原核抗性：KanNeo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pLAM12质粒的背景载体是pJL37载体，提供乙酰胺酶启动子（Acetamidase Promoter），质粒的参考文献：
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0517/OKSIM人源基因质粒 |
| P0518/FUW-tetO-hOCT4人源基因质粒 |
| P0519/pLenti6/UbC/mSlc7a1人源基因质粒 |
| P0520/FUW-tetO-hMYC人源基因质粒 |
| P0521/FUW-M2rtTA人源基因质粒 |
| P0522/pMXs-hSOX2人源基因质粒 |
| P1613/pLVML-ECMV-DDIT3人源基因质粒 |
| P0592/pLVML-ECMV-IRX5人源基因质粒 |
| P0593/pLVML-ECMV-PCSK9人源基因质粒 |
| P0667/pCMV6-CD19人源基因质粒 |
| P0670/pLVML-ECMV-V5-IRX5人源基因质粒 |
| P0672/mEos3.2-Clathrin-15人源基因质粒 |
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文献和实验后在培养基中加入PHA-L和PMA可以激活Jurkat细胞中CMV启动子，而单PMA就足以激活KG1和K562(人骨髓瘤白细胞)中的CMV启动子。SV40启动子的表达在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)时会提高，因为大T抗原可以刺激染色体外的合成。 06DNA量 高质量的DNA对于进行高效的转染至关重要。转染的质粒一定纯度好、浓度高、无内毒素。浓度不要低于0.35ug/ul。产物表达，48小时mRNA表达最高；72h蛋白表达最高。 07瞬时/稳定转染表达 稳定基因表达符合长期生产需求
后 4 小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液 感染增强剂浓度过高，具有毒性作用 降低感染增强剂浓度，并考虑减少暴露时间 转染的基因对细胞有毒性 改进基因设计，使用不同的启动子或条件诱导型表达系统，避免毒性基因的持续过表达 细胞状态不佳或培养条件不适 确保细胞健康，优化细胞生长状态，选择对慢病毒耐受性好的细胞系 7、病毒感染后 qPCR 检测无过表达效果，可能
B－内酰胺酶就会积累到很高的浓度。转接时（我是1:50转的），高浓度的酶可能破坏新鲜培养基中的Amp（而且我用的浓度是50 ug/ml）。这样，就造成最后收集的菌中，大部分都是没有带质粒的菌了。 当然还有一个可能的原因就是死亡的菌体分泌一些降解酶，使得表达检测失败。 这两种推测都只是推测，但我觉得第一种情况应该引起我们的重视。在使用Amp抗性的时候要格外注意。 4. 第三次做诱导就格外小心了。首先，晚上12点我才接菌，到第二天早上就开始转接
