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- 2025年10月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 英文名：
pET-21d
- 库存：
100
- 供应商：
kelei-bio
- 规格：
20μl
启动子: T7/lac
复制子: ColE1 ori，F1 ori
终止子: T7 terminator
质粒分类: 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒
质粒大小: 5440bp
质粒标签: N-T7, C-His
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃，有氧，LB
表达宿主: BL21(DE3)
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: T7:TAATACGACTCACTATAGGG
3'测序引物: T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG
质粒简介
The pET-21a-d(+) vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence plus an optional C-terminal His•Tag® sequence. These vectors differ from pET-24a-d(+) only by their selectable marker (ampicillin vs. kanamycin resistance). Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer.
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文献和实验晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
（ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner
中，现在Invitrogen已经克服了这个问题。在载体上多加四个碱基GTGG，就是这四个碱基使它可以与PCR产物定向连接。其作用机理见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D-TOPO®、pET101/D-TOPO®、pET102/D-TOPO®、pET151/D-TOPO®和pET200/D-TOPO®，这五个载体根据所带的标记、是否具有蛋白酶切位点而各有不同。详细信息参见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D
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