- ￥1200
- 烜雅生物
- XY-ZL0022
- 国产
- 2025年12月18日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
170
- 英文名：
CHS56(RP4-8)
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻干粉
英文名称：CHS56(RP4-8)
形式：冻干粉
参考用途：科研
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：37℃；24h；好氧；
存储条件：2-8℃
安全等级：1
形态：菌落形态：大小：1-2mm 形状：圆形 边缘：整齐 透明度：不透明 颜色：灰白色 隆起度：扁平 表面：光滑明亮 质地：湿润易挑起
操作步骤：
①准备 1 支含有 5~10mL 液体培养基的试管和 2 个平板；
②安全 柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂， 随后用镊子将其敲碎；
③吸取 0.5mL 液体培养基打入冻干管， 充分溶解后重新打回液体试管中，混匀；
④吸取 0.2mL 菌悬液 打入平板中，涂布均匀，重复两次获得两个平板；
⑤将液体试 管和平板全部置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。
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文献和实验酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 （三）获得含重组表达质粒的表达菌种 1、将连接产物转化大肠杆菌DH5α，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。 2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。 3、以此重组质粒DNA转化表达
入SDS一类去污剂溶解球形体。这种方法最大限度地减小了从具有正压的细菌内部把质粒释放出来所需要的作用力。 2)可用更剧烈的方法来分离小质粒。在加入EDTA后，有时还在加入溶菌酶后让细菌暴露于去污剂，通过煮沸或碱处理使之裂解。这些处理可破坏碱基配对，故可使宿主的线状染色体DNA变性，但闭环质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而不能彼此分开。当条件恢复正常时，质粒DNA链迅速得到准确配置，重新形成完全天然的超螺旋分子。 3)一些大肠杆菌菌株(如HB101的一些变种衍生株)用去污剂或加热裂解时可释放相对大量的糖
苄青霉素及 140 g/mL X-gal。作为载体的质粒都含有一种或两种抗生素的耐药基因，当把这种质粒转入大肠杆菌后，此菌便获得了抵抗这种抗生素的能力。目前分子克隆所用的克隆载体多含氨苄青霉素耐药基因，所以涉及最多的是氨苄青霉素筛选。当将氨苄青霉素加入培养基中后，只有含质粒的细菌能够繁殖，而不含质粒的细菌则不能繁殖形成菌落。此种筛选不能鉴别重组质粒或自身环化的质粒。在用含氨苄青霉素耐药基因的质粒进行克隆时，转化平板培养基中要加入氨苄青霉素。（四）质粒和菌株的保存:1. 质粒可以在-20 ℃ 冰冻保存。2. 菌株
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