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- 详细信息
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- 保质期：
2年
- 英文名：
pNTAP-B
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pNTAP-B哺乳表达质粒
别称: pNTAP-B
质粒属性
质粒简介
pNTAP-B是一个哺乳细胞pCMV系列表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4531 bp ds-DNA circular SYN 19-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4531
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 67..370
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 371..574
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 620..638
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
CDS 682..759
/codon_start=1
/product="calmodulin-binding peptide"
/label=CBP
/note="derived from skeletal muscle myosin light chain
kinase; binds calmodulin with nanomolar affinity in the
presence of calcium"
/translation="KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL"
CDS 778..891
/codon_start=1
/product="streptavidin-binding peptide"
/label=SBP
/note="selected from a peptide library; binds streptavidin
with nanomolar affinity (Keefe et al., 2001)"
/translation="MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP"
misc_feature 914..987
/label=MCS
promoter complement(1033..1051)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
polyA_signal 1325..1446
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1453..1908)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1935..2039
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2041..2398
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2249..2384
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2433..3227
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3459..3506
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 3835..4423
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 atgcattagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga
61 gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg
121 cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga ctttccattg
181 acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca
241 tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc
301 ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc
361 tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc
421 acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa
481 tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag
541 gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctggttta gtgaaccgtc agatccgcta
601 gcgattacgc caagctcgaa attaaccctc actaaaggga acaaaagctg gagctccacc
661 gcggtggcgg ccgccaccat gaagcgacga tggaaaaaga atttcatagc cgtctcagca
721 gccaaccgct ttaagaaaat ctcatcctcc ggggcacttg gaagcggtag cggtaccatg
781 gacgagaaga ccaccggctg gcggggcggc cacgtggtgg agggcctggc cggcgagctg
841 gagcagctgc gggccaggct ggagcaccac cctcagggcc agcgggagcc ctccggcggc
901 tgcaagctgg gctgcccggg cggatccccc gggctgcagg aattcgatat caagcttatc
961 gataccgtcg acctcgaggg ggggcccggt accttaatta attaaggtac caggtaagtg
1021 tacccaattc gccctatagt gagtcgtatt acaattcact cgatcgccct tcccaacagt
1081 tgcgcagcct gaatggcgaa tggagatcca atttttaagt gtataatgtg ttaaactact
1141 gattctaatt gtttgtgtat tttagattca cagtcccaag gctcatttca ggcccctcag
1201 tcctcacagt ctgttcatga tcataatcag ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc
1261 tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt
1321 tgttaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt
1381 cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt
1441 atcttaacgc gtaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt
1501 aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag
1561 aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga
1621 acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg
1681 aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc
1741 ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg
1801 aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc
1861 gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt
1921 ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt
1981 atccgctcat gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagaatc
2041 ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg
2101 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg
2161 aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc
2221 aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca
2281 ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc
2341 ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga
2401 tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag
2461 gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg
2521 gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca
2581 agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc
2641 tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg
2701 actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg
2761 ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta
2821 cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag
2881 ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagaacatca ggggctcgcg ccagccgaac
2941 tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg
3001 atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt ttctggattc atcgactgtg
3061 gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg
3121 aagaacttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg
3181 attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg
3241 gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg attccaccgc
3301 cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct
3361 ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccaccct agggggaggc taactgaaac
3421 acggaaggag acaataccgg aaggaacccg cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa
3481 aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc
3541 tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc
3601 accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg
3661 ccctgccata gcctcaggtt actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta
3721 atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg
3781 tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga
3841 tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt
3901 ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag
3961 agcgcagata ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa
4021 ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag
4081 tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca
4141 gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac
4201 cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa
4261 ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc
4321 agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg
4381 tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc
4441 ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc
4501 ccctgattct gtggataacc gtattaccgc c
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pNTAP-B哺乳表达质粒
别称: pNTAP-B
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pNTAP-B是一个哺乳细胞pCMV系列表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4531 bp ds-DNA circular SYN 19-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4531
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enhancer 67..370
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/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
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presence of calcium"
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with nanomolar affinity (Keefe et al., 2001)"
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/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1935..2039
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2041..2398
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
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/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2433..3227
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
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(Geneticin(R))"
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replication"
ORIGIN
1 atgcattagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga
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121 cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga ctttccattg
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1861 gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt
1921 ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt
1981 atccgctcat gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagaatc
2041 ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg
2101 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg
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2221 aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca
2281 ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc
2341 ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga
2401 tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag
2461 gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg
2521 gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca
2581 agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc
2641 tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg
2701 actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg
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2881 ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagaacatca ggggctcgcg ccagccgaac
2941 tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg
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3181 attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg
3241 gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg attccaccgc
3301 cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct
3361 ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccaccct agggggaggc taactgaaac
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3481 aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc
3541 tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc
3601 accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg
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3721 atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg
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4141 gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac
4201 cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2931/pENTR223-IFT57（217-1290bp点突变）人源基因质粒 |
| P2932/pENTR223-ELMOD39（1同义突变2点突变）人源基因质粒 |
| P2965/pENTR223-NR1I2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P2966/pENTR223-KLHL41人源基因质粒 |
| P2967/pENTR223-IKZF2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P2968/pENTR223-SLC25A23-C23G（1同义突变）人源基因质粒 |
| P2969/pENTR223-CYP39A1(2点突变）人源基因质粒 |
| P2970/pENTR223-THUMPD3（3同义突变）人源基因质粒 |
| P2971/pENTR223-GRB7人源基因质粒 |
| P2972/pENTR223-DIDO1（5287-6723bp点突变）人源基因质粒 |
| P2973/pENTR223-PLTP(2点突变）人源基因质粒 |
| P2974/pENTR223-ABAT(2点突变2同义突变）人源基因质粒 |
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