SK-BR-3-pLVX tdTomato-Nluc-Pur

SK-BR-3（乳腺腺癌细胞系）的传代方法

刚开始养SK-BR-3时，细胞状态不是很好，贴壁也不均匀，于是开始想办法，考虑是不是吹打的不够，或是传得过多，或是其它的什么，后来发现的确如此，细胞的生长状态与传代的方法有很密切的联系。我的传代方法是：以50平方厘米培养瓶为例，待细胞长满瓶底70％－80％1 、吸除或倒掉瓶内旧培养基。2 、PBS 5ml加入培养瓶，轻轻晃动培养瓶，让PBS流遍细胞表面，倒掉。3 、PBS 5ml加入培养瓶重复洗一次，倒掉。4 、加入1ml胰蛋白酶消化液，轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面，然后置37度

经验分享｜生物发光成像标记物选择

内下降约 70%。GLuc 突变体则具有更持久的类发光动力学，腔肠嗪必须通过静脉或心脏内注射系统注射进行动物成像，这极大地限制了动物的吞吐量。最后，GLuc 发出蓝光，峰值为 480 nm，限制了组织在体内成像的穿透。特别地，GLuc 在表达后，可有效从哺乳动物细胞中分泌出来，因此可以通过检测量化细胞培养基中荧光素酶活性。 NanoLuc 荧光素酶（NLuc）是一种来源于深海虾的新型荧光素酶，其分子量只有 19 kDa，可从哺乳动物细胞中分泌出来，也不需要翻译后修饰。不依赖于 ATP，底物

「癌细胞」：是我杀了我？PNAS 这项研究竟让肿瘤自己杀死自己

。 图片来源：PNAS 光学清除 BT474 肿瘤的成像细胞术 PACT（passive CLARITY）成像技术包括原位和提取后组织标记、保持和清除。研究人员使用 PACT 结合共聚焦成像来可视化和数字化重建肿瘤微环境，从而量化给药治疗的效果。 为了研究肿瘤的细胞组成，研究人员首先构建了 TdTomato 报告细胞系（BT474-TdTomato），通过 FACS 选择中度表达的转导细胞系。然后将 BT474-TdTomato 移植给另一组小鼠，在处理 11 天或 61 天后收集，通过 PACT