小分子pull-down实验服务

小分子pull-down实验服务

1.小分子pull-down技术介绍

pull-down 实验，即下拉实验，也称为体外蛋白结合实验，用以验证蛋白和蛋白间的互作关系，同时也可以某一蛋白为诱饵，钓取与诱饵蛋白存在相互作用的未知蛋白。

而小分子pull-down则是在pull-down的基础上，通过化学合成的方法将活性小分子进行修饰，连接上报告分子（如生物素），制备成小分子探针，用来钓取与小分子存在相互作用的蛋白或验证小分子与蛋白之间的相互作用。

根据小分子pull-down 的实验原理，可将其分为3类，分别是：直接小分子pull-down，光交联法小分子pull-down以及邻近标记交联法小分子pull-down。佰莱博生物提供上述3种小分子pull-down 实验服务。

1.1 直接小分子pull-down

通过探针分子上的报告分子（生物素）将其固定在与其亲和的固相支持物（如磁珠）上充当诱饵，与蛋白样品或细胞/组织裂解液共孵育，可捕获样品中与诱饵小分子互作的蛋白，接着通过洗涤或洗脱过程去除杂质，并将捕获的蛋白回收，进行 WB 检测分析或质谱鉴定。该方法不适用于瞬时结合、瞬时解离的小分子。

1.2 光交联法小分子pull-down

首先对药物小分子进行修饰，使其携带光交联基团，与细胞总蛋白孵育后，先进行 UV 照射使小分子与靶蛋白共价连接，随后通过点击化学反应使小分子生物素化。通过链霉亲和素磁珠对捕获的蛋白进行富集，洗涤，将捕获的蛋白回收，进行 WB 检测分析或质谱鉴定。

1.3 光交联法小分子pull-down

邻近标记交联法与直接法都是使用生物素化的小分子。但是邻近标记交联法在后续的孵育过程，使用的是改造后的链霉亲和素磁珠，能通过特殊的酶（pafA）催化反应，使小分子钓取到的靶蛋白与链霉亲和素之间产生共价连接，随后通过洗涤步骤洗去杂质，并回收得到的蛋白，随后进行 WB 检测或质谱鉴定。

 

佰莱博生物提供全方位的生物分子相互作用检测服务，涵盖生物物理、生物化学、细胞生物学以及计算机模拟等多个技术。具体服务内容如下：

(1) 生物物理实验：

ITC、SPR、MST、BLI、DSF、nanoDSF、MALS(动静态光散射)、AUC(分析型超离)、CD(圆二色光谱技术)

(2) 生物化学实验：

CETSA、Small Pull-Down、GST Pull-Down、Co-IP 、DARTS

(3) 细胞生物学实验：

小分子免疫荧光(小分子荧光共定位)

(4) 计算机模拟实验：

虚拟筛选、分子对接、分子动力学模拟、基于AI的蛋白质设计