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- 技术资料
- 库存：
99
- 英文名：
FlashPure Blood Total RNA Mini Kit
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
FlashPure Blood Total RNA Mini Kit
血液总 RNA 提取试剂盒（离心柱型）
目录号：91016
产品内容
|
产品成份 |
91016-50（50 次） |
|
10X 红细胞裂解液 RLB |
25 ml |
|
裂解液 RLT |
50 ml |
|
去蛋白液 RW1 |
40 ml |
|
漂洗液 RW |
10 ml（需加入指定量无水乙醇） |
|
70%乙醇 |
9 ml（需加入指定量无水乙醇） |
|
RNase-Free H2O |
10 ml |
|
RNA 吸附柱和收集管 |
50 套 |
|
RNase-Free 1.5ml 离心管 |
50 支 |
自备试剂
无水乙醇、β-巯基乙醇
保存条件
室温（15 ~ 25℃）下，存放 12 个月，不影响使用效果。
产品简介
适用于快速提取新鲜血液的总RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT qPCR，普通转录组测序、RACE等。
产品特点
1. 高效：提取全过程仅需 20 min！
2. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
操作步骤
提示：所有离心步骤均需要在室温（15 ~37℃）下进行。
① 第一次使用前，请先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指定量无水乙醇。
② 操作前，用 RNase-Free H2O 将 10X 红细胞裂解液 RLB 稀释到 1X。
③ 操作前，在裂解液 RLT 中加入 β-巯基乙醇至终浓度 1%，如 1ml RLT中加入 10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。
1. 在适合大小的 RNase free 离心管中加入 1 体积（<1.5 ml）加入各种抗凝剂新鲜血液 (颠倒混匀后)和 3 体积的红细胞裂解液 RLB，颠倒混匀，可轻弹管壁,确保混匀。
2. 室温放置 10 分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。
注意：如果 RNA 降解严重，可在冰上裂解，时间可以长一些以充分裂解。
3. 12,000 rpm 离心 20 秒，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清
（注意不要吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团。
注意：离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在 一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入红细胞裂解液，重悬后重复步骤 2，3。
注意：上清尽可能的吸弃，残留过多会稀释裂解液，造成裂解结合异常，产量纯度降低。
4. 涡旋或者轻弹管壁将白细胞沉淀完全松散重悬，加入 350 μl（< 0.5 ml全血）或者 600 μl（0.5~1.5ml 全血）裂解液 RLT，吹打混匀后用手剧烈振荡 20 秒，充分裂解。
注意：病人正常血样白细胞数量为 4000-7000/μl，如果血样中白细胞数量可能大幅增加，应该适当减少处理量。或者按照 350 μ（l < 2x106 白细胞）或者 600 μl（2x106~1x107白细胞）的比例加裂解液 RLT。
5. 用吸头吹打混匀帮助裂解，或者剧烈涡旋震荡，直到得到满意匀浆结果。(或者电动匀浆30秒)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高产量。
6. 向裂解物中加入等体积（一般 350 μl / 600 μl）的 70%乙醇，吹打混匀。
7. 每次转移≤700 μl 混合物至一个 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 离心 1 min，RNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。重复此过程，直到溶液全部上柱。
8. 加 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
9. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
10. 重复步骤 9。
11. 将 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上乙醇。
12. 取出 RNA 吸附柱，放入一个新的 RNase - free1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加 30-50 μl RNase free H2O（事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量）， 室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。
13. 提取的 RNA 可直接用于下游实验，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。
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