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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 英文名：
Column Extraction Of Blood RNA Kit
- 保质期：
RT
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- 保存条件：
RT
- 规格：
50T
试剂盒采用柱式法来提取全血RNA，无需使用红细胞裂解液裂解红细胞，操作简单，无需使用DNA酶也可以很好的吸附和去除基因组DNA，使用本试剂盒提取的RNA无蛋白和其他杂质污染，可用于RT-PCR、荧光定量PCR、体外翻译和分子克隆等多种下游实验。操作简单，用时短。
操作步骤：
1.在1.5mL离心管中加入300μL裂解液，向其中加入等体积的血液，震荡混匀，静置5min，然后4℃，12000rpm离心10-15min。
2.吸取上清到新的1.5mL离心管中，加入0.5倍上清体积的无水乙醇，混匀后加入到吸附柱中，4℃，12000rpm离心2min，弃滤液（留收集管，用于步骤4）。
3.将吸附柱放到干净的收集管上，在吸附柱中加入300μLRNA洗脱液（使用前请确认是否已加入无水乙醇），4℃，12000rpm离心2min，收集滤液。
4.在滤液中加入150μL无水乙醇，混匀后加入到新的吸附柱中（收集管使用步骤2中的收集管），4℃，12000rpm离心2min，弃滤液。
5.向离心管中加入500μL漂洗液Ⅰ（使用前请确认是否已加入无水乙醇），静置1min，4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
6.向离心管中加入600μL漂洗液Ⅱ（使用前请确认是否已加入无水乙醇），4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
7.重复操作步骤6。
8.4℃，12000rpm离心2min，将吸附柱敞口室温放置5min，以除去多余的乙醇。
9.将吸附柱放到一个干净的离心管上，向吸附柱中加入50-100μLRNase-freeddH2O，室温放置2min，4℃，12000rpm离心2min，得到RNA溶液，RNA保存于-80℃。
注意事项：
1.所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2.在提取RNA的过程中尽量在低温下操作。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
4.尽量使用新鲜的血液进行RNA的提取。
5.洗脱液的体积不应少于50μL，体积过少会影响提取效率，RNA产物应保存在-80℃，以防RNA降解。
6.RNA浓度及纯度检测：提取的RNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测纯度与浓度。OD260/OD280比值应为2.0-2.2。
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文献和实验Trizol法高产量、快速提取全血基因组DNA一例报道——呵呵
来，如果不剧烈震荡，就可以提出高产量的基因组DNA，虽然有组蛋白污染，不过跑PCR还是不受影响的。除了GADP外，我另外又试过十几种引物，结果都很好。如果用试剂盒提全血DNA，那当然好，前提是你足够有钱。我用酚/氯仿抽提全血DNA，产量一直比较小，试过纯水、RBC裂解液裂解RBC，都不是很理想，WBC损失很大，2ml的产量比不过Trizol法200ul的产量。我最近要摸大量的PCR的条件，所以极郁闷，老是要去提新的对照DNA，烦S了。这次发现了Trizol法的捷径，偶就爽歪了，嘿嘿。此外，常规提取
得到蛋白质图谱[1]： 图 1：从小鼠脾脏和肝脏中使用不同方法提取总蛋白的蛋白图谱 条带 1 为柱式法提取的蛋白样品，条带 2 为 RIPA 可溶组分（RIPA 裂解后的上清），条带 3 为 RIPA 不可溶性组分（丢弃的沉淀部分）。实验发现 RIPA 的不可溶组分蛋白质图谱与可溶性组分图谱相似，但是不完全相同。 丢弃的不可溶组分中仍然可检测到许多蛋白条带，覆盖了整个蛋白质图谱分子量范围，不同样品的不可溶组分图谱也各不相同。丢失的蛋白会引起蛋白图谱发生变化，改变不同种类蛋白的比例，且具有
，不同的裂解液配方溶解效率不同，通常使用的 NP-40、RIPA 等裂解液无法将所有蛋白全部溶出（如图 2），已经有研究发现细胞骨架、细胞外基质蛋白及部分膜蛋白、核蛋白等属于难溶蛋白，在提取过程中会形成不可溶沉淀[3]。如果目的蛋白属于这类难溶蛋白，仅使用可溶性组分（上清）用于 WB 实验时，目的蛋白将无法被检测到。针对这种情况，我们可以选择更加有效的裂解液配方，或者使用柱式蛋白提取法来增溶目的蛋白。例如，使用柱式法总蛋白提取法，可有效溶解难溶蛋白，避免不可溶组分的产生，有效解决蛋白丢失问题
