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类别 | 原代细胞 |
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文献和实验真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
qPCR 检测后进行功能评估。本研究对血浆外泌体 circLPAR1 可作为 CRC 高灵敏早期诊断标志物提供了新的证据。 qPCR 检测外泌体是强强联手还是无稽之谈? 我们也许会有疑问:外泌体本来就少,提取的 RNA 就更少,后续做 qPCR 检测岂不是难上加难?想知道 qPCR 检测外泌体是否具有合理性,我们需要先了解如何进行这项实验。 实验过程: 1)外泌体提取 包括 Umibio 在内的很多公司都有针对各种不同样本的外泌体提取试剂盒。样本预处理阶段很重要,甚至决定了后续提取外泌体的纯度和量
和数量充足,干细胞/原代细胞上清可在提取前采用超滤管(100KD)浓缩 3~5 倍后再提取。 3、使用EPF柱时堵塞如何处理? 答:过滤柱的孔径在 220nm 左右。如果出现堵塞情况,可以将柱子旋转 180 度再次离心。若上室还有残留液体,需要使用新的 EPF 柱,该柱子可以单独购买(货号 UR90102)。 4、沉淀法的具体原理是什么? 答:将高亲水性聚合物(聚乙二醇等)添加到含外泌体的溶液中后,外泌体周围的水分子被聚合物束缚,降低了外泌体的溶解度并诱导其随后的沉淀,使外泌体在低速离心下可以很容易
越少,做过外泌体的朋友都知道,每减少一次纯化步骤,就能获取更多的外泌体,每增加一步,就会大幅度降低外泌体的得率。 比如超离得率 15%-20%、沉淀法得率 35%-40%,等等。 因此,就 迫切需要一款无血清、低蛋白的化学成分确定的培养基 来满足 MSC 干细胞外泌体的上游细胞培养需要。 其他的培养体系到底有什么问题? Fetal Bovine Serum(FBS) 一直是细胞培养的霸主,客户一般选用的培养体系是:普通 MSC 细胞培养基+FBS,营养是比较足的,但是对于外泌体研究却面临







