通用型总 RNA 抽提试剂

产品概述：
产品名称：通用型总 RNA 抽提试剂
产品规格：100 mL
产品应用方向：DNA、RNA、蛋白质提取
产品保存条件：避光保存于室温，有效期见外包装
产品运输条件：常温
保质期（月）：24

产品介绍：
通用型总RNA抽提试剂是一款类似于TRIzol的一步法分离总RNA的试剂，适用于从细胞、组织、细菌及酵母等样本中快速分离总RNA。通用型总RNA抽提试剂有效裂解样本并抑制RNase活性，加入氯仿萃取分层，分为上层水相（含RNA），中间层和下层有机相，异丙醇和75%乙醇沉淀和洗涤得到纯度高的总RNA，整个实验过程操作简单，提取过程大约1 h。抽提得到的总RNA可用于Northern Blot、PolyA RNA富集、体外翻译、RNase保护分析、反转录等下游实验。本品含有苯酚，如不慎接触皮肤，应立即用大量流水冲洗。

使用方法：
注：请确保您所使用的离心管、移液器吸头以及其它器皿未被 RNase 污染。金属和玻璃制品可在 200℃烘烤 2 h 以上。塑料制品和水可用 0.01%的 DEPC 水浸泡过夜，高压灭菌。所有溶液应使用 DEPC 处理后的水配制。实验材料（自备） 异丙醇 无水乙醇 ddH2O（无RNase或0.01%的DEPC处理） 氯仿 0.01%的DEPC处理过并高温高压灭菌或者无RNase的枪头、1.5 mL、2 mL EP管以及其他操作器皿实验步骤
1. 不同样本裂解匀浆组织样本： 1） 将50-100 mg低温冻存的组织或新鲜组织用液氮在研钵中速冻后，碾磨成极细的粉末，期间不断添加液氮，保持组织样品处于冷冻状态。将粉末转移至1 mL总RNA抽提试剂中（样品体积不应超过总RNA抽提试剂体积的10%）。 2） 使用的组织为容易匀浆的样本，如大脑、肝脏等，取50-100 mg新鲜样本加入1 mL总RNA抽提试剂，直接用玻璃匀浆器匀浆至无明显组织块。贴壁细胞： 1) 贴壁培养的细胞吸去培养板中的培养基，按每10 cm2（相当于一个3.5 cm直径的培养板或六孔板的一个孔的面积）培养面积直接加入1 mL总RNA抽提试剂。2) 晃动培养板，使总RNA抽提试剂反复流过培养细胞的表面，待所有贴壁的细胞裂解后，将裂解液转移到一个1.5 mL的离心管内。悬浮细胞： 1) 悬浮培养的细胞离心收集细胞（无需洗涤细胞，洗涤细胞的过程极有可能会使RNA降解），按每5-10×106个动物、植物、酵母细胞或1×107个细菌细胞加入1 mL总RNA抽提试剂，反复吹打，使细胞分散裂解。 2) 一些酵母细胞或细菌细胞可能需要用匀浆仪处理或者液氮研磨处理。注：(a) 样本过多可能会导致裂解不充分，导致RNA浓度和纯度降低。(b) 植物组织样本建议液氮研磨。
2. 裂解后的匀浆液于室温放置5 min，使核酸和蛋白质复合体完全分离。
3. （可选）如样品中含有较多组织碎片或多糖等不溶物质（常见于抽提植物组织RNA时），可于4℃，12000×g离心10 min，取上清液进行下一步操作。
4. 按每使用1 mL总RNA抽提试剂加入0.2 mL氯仿，剧烈震荡混匀15 s，室温放置3-5 min。
5. 于4℃，12000×g离心15 min。样品将分为三层：下层为红色有机相，上层为无色水相，中间层为白色的DNA和蛋白质。
6. 吸取上层水相，转移到一个干净的离心管中（请避免吸取中间层）。加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀，室温放置10 min 沉淀RNA。小分子RNA（如microRNA等），在异丙醇沉淀过程中会大量丢失，因此如希望回收microRNA等小分子RNA，可改用2.5倍体积乙醇，于-20℃沉淀30 min以上。注：若同时提取样本DNA和（或）蛋白质，则保留中间层和下层有机相于4℃冰箱。若只提取样本RNA，则可丢弃中间层和下层有机相。
7. 于4℃，12000×g离心10 min，收集沉淀。离心后，管底和管侧可见白色或半透明状RNA沉淀。弃上清。
8. 加入1 mL75%乙醇（无RNase水配置），轻弹管壁，RNA沉淀飘起后，上下颠倒洗涤RNA。于4℃，12000×g离心10 min，弃上清。
9. 将离心管放回离心机轻甩几秒，使残留在管壁的乙醇溶液集中到管底，用移液器吸头小心吸去残余的乙醇溶液。
10. 打开离心管管盖，室温晾干RNA沉淀。一般3-5 min即可。加入适量无RNase的水溶解沉淀（可在55-60℃的水浴中孵育10- 15 min促进RNA的溶解）。 

注意事项：
1．提取RNA前，需要将工作台面用75%乙醇擦拭干净，操作期间必须佩戴手套和口罩，防止RNase污染。
2．因试剂中含有苯酚等有毒物质，操作时注意佩戴口罩，手套，实验服。
3．RNA 易降解，操作前请按照说明书自备器材。
4．建议样本尽量使用新鲜样本或者低温冻存的样本。