北京柱式分枝杆菌RNA提取试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京柱式分枝杆菌RNA提取试剂盒说明书是高品质的RNA纯化产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多柱式分枝杆菌RNA提取试剂盒等RNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京柱式分枝杆菌RNA提取试剂盒说明书
规格：50次
编号：BTN130845
英文名：Mycobacteria RNA Column extraction kit
品牌：百奥莱博

北京柱式分枝杆菌RNA提取试剂盒说明书极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·超快核酸电泳液(干粉)
编号：BTN51210
英文名称：SuperBuffer-2 Powder
规格：50L
SuperBuffer-2是我司在SuperBuffer基础上开发的DNA/RNA 两用快速电泳液。它跟SuperBuffer一样，能以高达30 V/cm的电压电泳，达到快速电泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是，本产品对盐离子浓度敏感度低，同时还能用于RNA电泳。

产品特点：
1.快速，电泳时间短，对分辨率要求不高的电泳(如PCR和酶切检测等)甚至可以在5-10分钟内完成。
2. 不影响后续的Southern杂交，DNA胶回收和DNA连接等反应。
3. 价格与TBE(干粉)相当甚至更便宜。
4. DNA胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收。

储存条件：常温保存和运输，有效期两年。

使用方法：

一：溶液的配制
将本产品全部加到一个干净的容量适当的容器中，按下表的用量加入蒸馏水并在室温下用磁力搅拌器搅拌，直到干粉完全溶解(一般需要30分钟左右)。
配法一(配制20X浓缩液)：加2.5升得到20×工作液
配法二(直接配制工作液)：加水50升得到50×工作液
注：其他浓度的浓缩液配制可以按比例计算，但浓缩液浓度不能超过20×，否则干粉不能全部溶解。由于干粉含多种未彻底混合均匀的成份，所以必须一次性全部用于溶液的配制。如果缓冲液(浓缩液或工作液)长时间不用，最好灭菌后放4℃长期保存。

二：DNA电泳
将SuperBuffer-2浓缩液用蒸馏水稀释到1×，除了需要使用较高电压才能得到快速的电泳结果外，操作跟使用TAE和TBE基本一样。需注意的地方是：
1.电压：在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常规电压，也可以使用较高电压，只是使用常规电压时，其快速的优越性就体现不出来。使用较高电压时，由于各电泳槽结构不同，最佳电压需要稍做摸索。第一次最好将工作电压调到最高电压的80%左右，即平均25 V/cm(电极距离)。对一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分钟；对大的电泳槽，可用400-450V 跑5-10分钟。每次根据电泳结果和缓冲液温度决定各电泳槽的最佳工作电压和时间。一般电压越高，电泳时间越短。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象，请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。缓冲液电泳次数超过3次或缓冲液中有细菌/真菌生长也会出现此现象，需要更换新的缓冲液。
2.胶浓度：建议将琼脂糖凝胶的浓度控制在0.8%左右，对于长度在100bp以下的DNA片段，可以将琼脂糖凝胶的浓度提高到1.2%左右。由于每次溶胶过程中会丢失水份，所以最好在溶胶后适当补充水份(可以前后称重)，否则胶浓度会逐渐增加，DNA的移动速度会减低、产热会增加。使用0.8%左右的琼脂糖凝胶的好处是一方面可以节约胶的用量，另一方面可以使DNA的泳动速度更快，同时还能够提高DNA的回收率。
3.染色：如果使用EB，最好把染料加入到融化后的凝胶中(只是EB的终浓度最好为0.4 -0.5μg/mL，比使用TAE和TBE时稍高)，但也可以加入到电泳缓冲液中或/和电泳上样液中。如果使用百奥莱博低毒染料绿如蓝，最好将染料加入到融化后的凝胶中。如果只有胶中有染料，则长时间电泳后(超过20分钟)，大部分染料在高压下会与DNA 分离，DNA 条带可能会看不见或看起来很淡，此时应该再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(终浓度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2与SYBR Green I 也有良好的兼容性，可以结合使用。
4. DNA 条带扭曲：DNA样品中所含SDS 量过高时(SDS 主要来于上样液)，DNA条带将出现扭曲，影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液。
5. 反复使用：1×SuperBuffer-2电泳液至少可以重复使用2-3次，如果使用大电泳槽，可以重复使用的次数会更多。
6. TAE和TBE胶：已经用TAE和TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶可以直接放入1× SuperBuffer-2电泳液中按上述电泳条件电泳，但有时候会有扭曲现象。

三：RNA电泳
跟DNA电泳一样，必须在使用前用水将SuperBuffer-2溶液稀释到1×，其使用方法跟DNA电泳的主要区别是：
1.电压：RNA电泳时，最高使用电压大约只有DNA 最高使用电压的一半左右，所以一般minigel可以使用150 V左右的电压。由于各实验室电泳槽规格各异，第一次电泳时，最好将工作电压调到跟MOPS电泳一样的电压，每次再逐渐往上调电压和时间，根据电泳结果和测定缓冲液的温度决定今后的工作电压。
2. RNA上样液：RNA必须与含变性剂的RNA上样液混合，并在80℃保温10分钟后冰浴2-5分钟再上样。不能直接将RNA样品上样或使用DNA上样液，否则电泳不但很难得到清晰的条带，并且在加样孔中还会有看似DNA污染的条带出现。推荐使用百奥莱博生产的RNA变性/上样/染色三合一即用型溶液RNAload。
3.胶浓度：RNA电泳最好使用1%-1.5%的琼脂糖凝胶，用1X SuperBuffer-2配制。
4.染色：同DNA电泳。


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·*霉素干粉
编号：BTN60102
英文名称：Chloramphenicol Powder
规格：1g
*霉素是白色至微黄色针状结晶或片状结晶。分子式为C11H12Cl2N2O5，分子量为323.13。真空时升华。无臭,味苦。易溶于醇类,微溶于乙*(代"醚"),不溶于*、石油醚和植物油。水溶液呈中性。熔点150.5～151.5℃。在干燥时稳定，在弱酸性和中性溶液中较安定，煮沸也不见分解，遇碱类易失效。

结构式：


储存条件：常温运输、4℃保存、有效期一年。

·石蜡包埋组织RNA提取试剂盒
编号：BTN81102
英文名称：FFPE RNA Extraction Kit
规格：30次
石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料，但是由于它们的保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包埋组织中快提RNA的试剂

试剂盒特点：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2.含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲*，健康环保。
3. 能有效去除基因组DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。
4. 即开即用，客户自己不需要准备额外的试剂。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	30mL
溶液B	3mL
溶液C	5mL
溶液D	15mL
微量核酸沉淀剂	30mL
RNase-free水	10mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，4℃保存(溶液C需要-20℃放置)，有效期一年。

使用方法：
1. 将5片厚度为6-8μM的石蜡包埋组织切片转移到1.5mL塑料离心管(最好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL溶液A，在振荡器上以最大速度振荡10秒。
2. 加入75μL溶液B，在振荡器上以最大速度振荡10秒。
3. 7000×g室温离心2分钟，溶液将形成两个相，其中组织切片位于下相。
4.小心吸弃上层液体。
5. 将离心管放入真空离心机中抽干下层的液体，一般需要一小时。
6. 加入150μL溶液C，55℃保温过夜。
7. 短暂离心，95℃保温10分钟。
8. 加入0.5mL溶液D，充分震荡半分钟。
9. 加入0.1mL自备*仿，振荡器上充分振荡混均30秒。
10. 13000-5000×g室温离心3～5分钟。
11. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的DNA。
12.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡30秒混匀。
13. 13000-15000g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。
14.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇，振荡混匀30秒。
16. 13000-15000g室温离心1分钟。
17.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
18. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
19.室温放1-2分钟后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。样品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的电泳检测：
21. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
22. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。


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