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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温,12个月
- 库存:
现货
- 供应商:
鹿森生物
- 规格:
3×100ml
注意事项:主要由弱酸、DEPC处理水、乙醇等组成。
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文献和实验个细胞。考虑到我们后续还要对酶切用量进行优化,实际准备了足量细胞(每组约 1.5×107 个细胞)。在我们实验前,我们仔细观察了细胞的状态和密度,细胞状态很健康,贴壁良好,也达到了 80% 左右的汇合率,一切都符合 ChIP 实验的要求。拿出试剂盒,我们首先对各种标配试剂置于冰浴中进行了标记。由于试剂盒标配的 DTT 为干粉,因此我们需要配制 1M DTT 溶液(具体地,192.8 mg DTT#7016 加 1.12 ml dH2O,确保 DTT 完全溶解)。然后,我们取出并室温预热 200
)、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等;试剂:试剂盒含TdT 10×、荧光素标记的dUTP 1×、标记荧光素抗体的HRP;自备试剂:PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇(100、95、90、80、70%)、DAB工作液(临用前配制,5 μl 20×DAB+1μL 30%H2O2+94 μl PBS)、Proteinase K工作液(10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl, pH 7.4-8)或细胞通透液(0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium
液等。这些固定液都有不同的优缺点因此要根据具体的实验对象,选择最佳的固定液。 4. 固定方法 组织标本取材后,迅速放入固定液中2~4h,取材组织大小为1cm×1cm×0.5cm,不宜太大。必要时,动物组织可进行灌流固定,然后将组织按要求取材放入20%蔗糖中,4℃过夜,次日可行冰冻切片。 (二)切片及细胞标本的制备 1. 载玻片的处理 因为原位杂交一般在载玻片上进行,所以载玻片必须保持清洁且不能有任何核酸酶的污染。一般载玻片可先经洗衣粉浸泡过夜,用流水冲洗、酸中浸泡
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