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文献和实验CsCl 1.2 (26.8 g + 92 mL 10 mM Tris-HCl,pH=7.9),再小心加入病毒上清液至体积达到20ml。平衡后,4℃下 23000rpm离心90min (SW28转头),用注射器抽吸下层蓝白色病毒带) 4、病毒透析去盐:配置透析液(10 mM Tris pH 8.0,2 mM MgCl2,5% sucrose),灭菌处理。4℃透析,更换3次透析液,可基本去除CsCl,病毒保存于-80℃。 六、病毒滴度测定(TCID50) 1 、细胞准备:96孔板中接种100μl
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为重组缺陷性菌株,可稳定扩增已鉴定的重组质粒),扩增细菌并纯化质粒。 三 重组病毒质粒转导 293 细胞 1 293细胞培养:转导24小时前,以方瓶为例,接种2×106 293细胞于25cm2 方瓶,使生长密度约50-70%。(也可以使用6孔或96孔板) 2 以PacI单酶切重组病毒质粒(转导25cm2 方瓶约需4µgDNA),完全线性化后,乙醇沉淀,再以20 µl ddH2 O溶解。 3 脂质体包裹质粒(以Lipofectamine为例):每4µ
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