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人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
内胚层 (AFE) 细胞后的第 8 天,应观察到较高细胞密度。下面的方案提供了 6 孔板型的参考接种密度。其他板型的接种密度需做调整 1. 从培养箱中取出含第4天定型内胚层培养物的6孔板。 2. 从每个孔中吸出培养基。用2ml 1X PBS (BSS-1006-B)洗净每孔。 3. 每孔加入1ml Accumax™溶液(A7089),分离定型内胚层细胞。37°C孵育6-8分钟。 4. 5分钟后,目测检查培养板。轻轻敲击培养板的边缘,使细胞进一步分离。大多数细胞应该分离开并悬浮于液体中。如果不是,再孵育2分钟
浓度为1~5%。此药作静脉注射时,由于药液迅速进入脑组织,故诱导快,动物很快被麻醉。但苏醒也很快,一次给药的麻醉时效仅维持半至一小时。在时间较长的实验过程中,可重复注射,以维持一定的麻醉深度。此药对胃肠道无副作用,但对呼吸有一定抑制作用,由于其抑制交感神经较副交感神经为强,常有喉头痉挛,因此注射时速度必须缓慢。实验剂量和方法:狗静脉注射20~25mg/kg体重;兔静脉注射7~10mg/kg体重。静脉注射速度以15秒钟注射2ml左右进行。小鼠1%溶液腹腔注射0.1~0.3ml/只;大鼠0.6~
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