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文献和实验酶分离下来细胞后,用200目滤网过滤,待细胞自然沉降,得长杆状细胞就是,好像不用分离纯化。 5、问:线粒体特异性的标记物有哪些? 答:可以用JANUS GREEN B(詹那斯绿)染,线粒体中的细胞色素氧化酶可以氧化其成蓝绿色。这是活体线粒体特异性染料。你的目的是否与此有关? 6、MTT法测细胞黏附率的问题: 问:不少文章提到在他们使用MTT法测细胞黏附率或黏附抑制率时,将细胞种入96孔板孵育前,都预先按分组要求,将细胞与干预药物先一起加入试管中或24孔板中孵育30min,然后再种入96孔
,然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。以软板为载体的试验,需先将板置于标准96孔的座架中,才可进行比色。最好在加底物液显色前,先将软板边缘剪净,这样,此板就可完全平妥坐入座架中。 比色时应先以蒸馏水校零点,测读底物孔(未经任何反应仅加底物液的孔)和空白孔(以生理盐水或稀释液代替标本作全过程的孔),以记录本次试验的试剂状况。其后可用空白孔以蒸馏水校零点,以上各孔的吸光度需减去空白孔的吸光度,然后进行计算。比色结果的表达以往通用光密度(oplical density,OD),现按规定用吸光
0. 25%胰酶消化. 含10%新生牛血清的PR MI1640培养液悬浮细胞. 制成单细胞悬液. 调整细胞浓度为1. 5×104个/ Ml. 96孔板每孔中加入200 ul. 细胞的边缘孔用无菌PBS填充。 2) 37 ℃. 5%CO2培养箱中培养过夜. 无血清PR MI1640培养基饥饿细胞24小时。 3) 细胞培养液换成含1%新生牛血清的PR MI1640培养液200 ul. 并加入不同的干预因素. 每个浓度组设5个复孔
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