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文献和实验[资源][原创] 蛋白标签纯化技术——CBP(钙调蛋白结合肽)
缓冲液中能够特异性的被钙调蛋白树脂捕捉吸附,并且在中性环境中能够被2 mM EGTA洗脱,这与6组氨酸亲合标签纯化体系相比反应条件要温和许多。仅有4-kDa 大小的CBP tag 与26-kDa GST 标签相比对蛋白分子的影响非常小。在所表达的蛋白分子上包含一个凝血酶或肠激酶列解位点,依靠它可以非常方便的移除CBP标签。在哺乳动物细胞中表达的标签纯化系统(两步纯化法用于高纯度的要求)Mammalian TAP System本系统同时用到了streptavidin binding peptide
一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
人钙调蛋白 (Calponin)ELISA 试剂盒 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 Calponin 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 Calponin与单抗结合,加入生物素化的抗人 Calponin ,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合,加入底物工作液显蓝
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