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96T
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文献和实验蛋白,如 Src-家族激酶,被 N-肉豆蔻酰化。N-肉豆蔻酰基转移酶 (NMT) 专门促进 N-肉豆蔻酰化,并使用肉豆蔻酰 coa 作为底物将肉豆蔻酰基连接到 N-末端甘氨酸上。因为甲硫氨酸是所有真核生物蛋白质的 N-末端氨基酸,这个 PTM 在添加肉豆蔻酰基之前需要甲硫氨酸被上述 MAP 裂解;这是单个蛋白质上多个 PTM 的一个例子。③、S-palmitoylation(S-棕榈酰化)通过棕榈酰酰基转移酶 (PAT) 将来自棕榈酰基 CoA 的 C16 棕榈酰基添加到半胱氨酸残基的硫醇盐侧链。由于疏水
【求助】如何提取细胞中的cAMP?和普通蛋白的裂解buffer一样么?
磷酸二酯酶抑制剂。 贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer,有时要加磷酸二酯酶抑制剂。 关于是否需要乙酰化的问题,不同的试剂盒有不同的要求,主要取决于抗体是否灵敏,也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏,可以免去乙酰化的那一步,太容易引入误差。 另外,如果用荧光法、发光法检测碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶的话,也没必要进行乙酰化,因为荧光法、发光法检测比显色法检测灵敏度高。 另外,Promega公司有基于培养细胞的cAMP检测试剂盒
:分别是竞争性蛋白质结合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄层色谱法[5]。在80年代,放射性免疫分析法得到了广泛的应用和改进,由于这种方法采用放射性核素标记,应用范围受到一定限制,为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性,进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒,这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应,所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗,毫无疑问,兔多抗在约四十年的cAMP,cGMP定量
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