Sideroflexin 1蛋白(SFXN1)等多因子检测试

蛋白免疫印迹（Western Blot）技术手册

的浓度过高也会导致非特异性条带。亦可以在封闭液中孵育二抗（和一抗），但可能在降低背景同时导致特异性条带的信号也减弱，可能是封闭剂阻碍了抗体与靶蛋白的结合。 孵育时间和温度：室温、1-2 hours, 摇动。 二抗连接物：推荐使用二抗连接HRP，不建议连接AP碱性磷酸酶，因其不够灵敏。 12.  显色 显色分为酶促底物发光和化学发光法或荧光法 酶促底物发光法代表为DAB显色法，与其它同类方法的比较如下图所示：

【求助】如何提取细胞中的cAMP？和普通蛋白的裂解buffer一样么？

磷酸二酯酶抑制剂。 贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer，有时要加磷酸二酯酶抑制剂。 关于是否需要乙酰化的问题，不同的试剂盒有不同的要求，主要取决于抗体是否灵敏，也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏，可以免去乙酰化的那一步，太容易引入误差。 另外，如果用荧光法、发光法检测碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶的话，也没必要进行乙酰化，因为荧光法、发光法检测比显色法检测灵敏度高。 另外，Promega公司有基于培养细胞的cAMP检测试剂盒

Western Blot 实验试剂选购指南

我们开发了此步免疫检测的完整的试剂盒,即HRP标记的二抗检测系统(含封闭液,洗液,底物,HRP/亲和素-二抗),您只需准备好一抗,并选择和一抗动物来源相应的试剂盒就可以.对于实验来说,采用完整的试剂盒可以避免各种试剂的不匹比而带来的结果不理想. Western Blotting DAB显色法检测试剂盒 试剂盒的内容： （1）封闭试剂：10g蛋白质干粉2包。 （2）浓缩抗体稀释液：20ml×2瓶，为10倍浓缩液。 （3）过氧化物酶标记二抗。1ml。效价1：200―400 （4）DAB浓缩