G蛋白α激活活性多肽O(GNaO1)等多因子检测试剂盒(流式

非放射EMSA实验技术讨论

这样一个问题： 某公司的激活-和转运检测试剂盒，监测是否激活NF-KB测试剂盒原理：NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物，分布在细胞浆中。在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下，IκB-α会在Ser32和Ser36被磷酸化，随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NF-κB和IκB-α解聚后，其核定位序列被暴露，从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。通过免疫染色检测NF-κB的主要亚基p65是否被转移到细胞核内，就可以判断NF-κB是否被激活.本NF-κB

【求助】如何提取细胞中的cAMP？和普通蛋白的裂解buffer一样么？

磷酸二酯酶抑制剂。 贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer，有时要加磷酸二酯酶抑制剂。 关于是否需要乙酰化的问题，不同的试剂盒有不同的要求，主要取决于抗体是否灵敏，也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏，可以免去乙酰化的那一步，太容易引入误差。 另外，如果用荧光法、发光法检测碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶的话，也没必要进行乙酰化，因为荧光法、发光法检测比显色法检测灵敏度高。 另外，Promega公司有基于培养细胞的cAMP检测试剂盒

【求助】那位大侠用过CAMP测定试剂盒？急需帮忙

：分别是竞争性蛋白质结合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄层色谱法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了广泛的应用和改进，由于这种方法采用放射性核素标记，应用范围受到一定限制，为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性，进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒，这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应，所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫无疑问，兔多抗在约四十年的cAMP，cGMP定量