Exocyst复合体成分3(EXOC3)重组蛋白

【专题讨论】超详细包涵体复性常见问题分析

包涵体复性常见问题分析 1. 对于尿素和盐酸胍该怎么选择? 尿素和盐酸胍属中强度变性剂，易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆性变性作用，所需浓度尿素8-10M，盐酸胍6-8M。尿素溶解包涵体较盐酸胍慢而弱，溶解度为70-90%，尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐，对重组蛋白质的氨基进行共价修饰，但用尿素溶解具有不电离，呈中性，成本低，蛋白质复性后除去不会造成大量蛋白质沉淀以及溶解的包涵体可选用多种色谱法纯化等优点，故目前已被广泛采用。 盐酸胍溶解能力达95

[转贴]包涵体纯化复性

，我觉得比通常的直接洗脱效果好。 包涵体一般难溶解，所以你要注意未溶解的部分，你可以跑电泳对比，因为有时候难溶解的就是你的目标蛋白，所以每次处理都要把上清和沉淀跑电泳对比，免得把目标蛋白弄丢了。 此外刚处理完的包涵体好溶解。冷冻后难溶解，溶解也需要长点时间，也需要大量的溶剂。如果说是不少不溶解的不是你要的，那就不用管了。 2、如何得到比较纯的包涵体 对于包涵体的纯化，包涵体的前处理是很重要的。 包涵体中主要含有重组蛋白,但也含有一些细菌成分,如一些外膜蛋白、质粒ＤＮＡ和其它杂质。洗涤

过表达都是相似的，敲除的方法却很多

获得敲除转化子的概率。 2载体转化和表达比较关键，周期较长，对细胞感受态要求也较高。 3对于真核生物的同源重组基因敲除研究较少：真核生物转化不容易，表达周期长，基因调控复杂，敲除之后不一定出现特定表型。  另外， 也有一些   在同源重组基础上发展起来的新技术   1 Red同源重组系统   Red同源重组系统主要包含3种蛋白质分子，分别称为Exo、Beta和Gam，这三者是λ噬菌体中的高效重组蛋白