间充质干细胞无血清培养基

产品介绍

• 可用于多种来源的间充质干细胞的原代细胞分离及传代培养，如：脐带(UCMSCs)、脂肪(ADSCs)、骨髓(BMSCs)、羊膜(AMSCs)、毛囊(HFSCs)、牙髓(DPSCs)等， 并保持细胞多向分化的潜能。
• 无血清，无任何动物源组分，不含抗生素，性能稳定，批间差异小。
• 高细胞扩增率，相同代次细胞数量远高于市场上同类型产品。
• 自主化研发与生产体系，供货稳定，性价比高。
• 支持临床级 / 药品级细胞培养。

使用方法

完全培养基建议现用现配，2周内用完（每次取用尽量减少暴露空气中的时间，取用后及时封口，避免 pH 快速升高）。

如培养体系小，建议根据实际用量将添加物分装冻存，按比例配制使用，避免反复冻融。

接种密度

细胞传代时间

一般为 3 天（72h）左右。不同 hMSC 生长速度有差异，推荐以细胞汇合度选择准确传代时机，细胞汇合度80-90%左右传代，细胞汇合度过高（＞95%）会影响后续细胞生长。

细胞形态

细胞梭形，呈旋涡状生长

间充质干细胞培养   

原代培养

分离脐带华通氏胶组织，使用组织块贴壁法进行原代培养。每个T75培养瓶接种0.5g华通氏胶。37℃细胞培养箱培养1-2h后加入6-8ml细胞培养基。D2-D3补充培养基5ml，D7-D10天换液，弃去上清，加入新培养基10-15ml，D12-D14天观察细胞扩增情况，进行消化传代。

细胞最早爬出时间5-7天，镜下可以观察到少量零散细胞。

组织块贴壁效率高，贴壁的组织块多。

收获的细胞数更多。

传代培养

与市场同类型产品相比，具有更高的扩增效率，高代次细胞衰老较慢，能支持培养20代以上。

培养效果

novastem-MSC体系P1-P5平均倍增次数为20.7倍。

以一根脐带为例，如分离约10g华通氏胶组织，P0代可获得2.0E7细胞，P3代理论可获得1.71E11的细胞。

按照常规使用剂量单份5E7制备成产品，可制成3420份。

总结

细胞传代时间

       一般为3天（72h）左右。不同hMSC生长速度有差异，推荐以细胞汇合度选择准确传代时机，细胞汇合度80-90%左右传代，细胞汇合度过高（＞95%）会影响后续细胞生长。培养基用量0.2mL/cm2。无需包被，连续培养3天无需换液。其他培养体系转换到novastem-MSC时，初始细胞扩增倍数可能较低。建议原培养基和novastem-MSC1:1混合后复苏接种，培养1代后可完全转换到novastem-MSC体系。

 

细胞传代时间

       建议选用比较温和的胰酶，例如Gibco TrypLE™ Express酶（重组，1X），用PBS1:1稀释，配制成胰酶工作液后使用。消化时间约3分钟，一般不超过5分钟。消化1-2分钟后，可轻轻拍打培养容器，观察到大多数细胞脱落时即可用培养基终止消化。

 

细胞冻存

       建议DMSO终浓度5%。可以在细胞消化前先配制DMSO：完全培养基=1:9（体积比）的冻存液，2-8℃预冷保存。待冻存细胞用完全培养基混匀后，缓缓加入等体积的冻存液，混匀后分装。

质控分析

培养基质检报告

放行检验合格后，出具相应的COA，主要检测项目包括性状、理化、安全性及功能性指标。

细胞表面标记物检测

培养的hMSCs表面标记物检测：

• CD73、CD90、CD105、HLA-ABC阳性率≥95.0%。
• CD14、CD19、CD34、CD45、HLA-DRDPDQ阳性率≤2.0%。

细胞多向分化潜能

细胞免疫调控能力检测

培养的hMSCs具有抑制淋巴细胞增殖、促进Treg上调、促进Th1和Th17下调和抑制TNF-α的表达。

细胞迁移能力检测、成血管能力检测

细胞染色体核型分析

连续培养的hMSCs核型检测结果：未发现染色体数目或结构异常。

细胞体外成瘤性试验

连续培养的hMSCs体外成瘤性试验结果：hMSCs在软琼脂克隆法中均无法形成克隆，提示其在体外不具备成瘤性。

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