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- 2026年04月24日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
200
- 英文名：
Nuclear/Membrane Yeast Two-Hybrid Library Construction Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
武汉金开瑞生物工程有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
5T
实验原理
酵母核体系文库构建试剂盒，提供了一种从总RNA或者poly A+ RNA获得高质量全长cDNA文库的方法。本试剂盒在GAL4酵母单双杂的系统上，通过对PGADT7 序列载体进行改造，额外增加了三框文库的构建。本产品适用于从100 ~500 μg 不同来源的真核生物总 RNA 中，经过 mRNA 分离、单链 cDNA 合成、双链 cDNA 合成、双链 cDNA 分选、小量连接转化、大量连接转化，构建获得高质量的酵母cDNA文库。该试剂盒提供的试剂可以用来构建5个cDNA文库。
相较于市面上其他的试剂盒，本试剂盒针对建库质量做了以下优化：
1.该试剂盒提供的反转录酶是市面上经过改造的MMLV 反转录酶，显著增加了反转录酶的热稳定性和半衰期，合成cDNA效率更高，片段长度完整性更好；
2.该试剂盒通过对PGADT7载体进行了移码突变，形成三个不同的读码框（命名为PGADT7-S1，PGADT7-S2，PGADT7-S3），相对传统以引物的方式引入的突变而言，新型的三框文库构建方式只需要合成一份双链cDNA，可以保证三框文库的片段长度，阳性率，文库滴度等信息的一致性。
3.该试剂盒在三框文库载体的基础上，通过引入CCDB自杀基因极大降低了空载的产生，基本实现100%阳性率；
4.该试剂盒提供的DH10B是经过了高抗性压力筛选的菌株，配合试剂盒中的优良方法制备的感受态以及对应的仪器工作条件，文库的转化效率能够达到至少1×10^10；
5.该试剂盒提供的试剂与市面上其他公司相比，更加齐全，基本不需要再额外购买其他试剂材料。
实验流程
实验时间表
试剂盒组分
常见问题
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文献和实验细胞核蛋白质提取试剂盒 Nucleoprotein Protein Extraction Kit 产品说明：本试剂盒提供独特的组份，采用特殊的非离子型去污剂，以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂，能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再用Lysis Buffer对细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可合适用于SDS-PAGE电泳、Western Blot、免疫共沉淀，EMSA
内就可得到结果。8、核外双杂交系统。由于许多待研究的蛋白质是膜蛋白（如受体蛋白），需定位到膜上才能表现正常的生物功能，且真核细胞蛋白质的成熟还要经过正常的细胞核内部不可能发生的翻译后加工修饰如二硫键的形成，糖基化、聚异戊二烯基化等，传统的酵母双杂交系统已不太适用。针对这一情况，Aronheim等人对酵母双杂交系统做了重大改进，将蛋白质间相互作用的场所从核内转移到酵母细胞膜上进行，构建了SOS救活系统（SOS recruitment system, SRS）。酵母细胞的一种温度敏感株由于缺乏鸟苷酸交换
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