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- 文献和实验
- 技术资料
| 品牌 | 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 |
|---|---|---|---|
| NEB | E7120 | NEBNext®酶学转化法甲基化建库试剂盒 | NEBNext®Enzymatic Methyl-seq Kit |
| 货号 | 产品中文名称 | 产品英文名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| E7120L | NEBNext 酶学转化法甲基化建库试剂盒 | NEBNext® Enzymatic Methyl-seq Kit | 96 rxns |
| E7120S | NEBNext 酶学转化法甲基化建库试剂盒 | NEBNext® Enzymatic Methyl-seq Kit | 24 rxns |
产品特点
NEBNext 酶学转化法甲基化建库试剂盒(EM-seq™)提供了一种检测 5-mC 和 5-hmC 的新方法。
虽然重亚硫酸盐测序是研究 DNA 甲基化的金标准,但这种转化方式会对 DNA 造成损伤,导致 DNA 断裂、丢失和偏嗜。
相比之下,NEBNext 酶学转化法甲基化建库试剂盒所提供的高效酶促转化方法可地减少对 DNA 的损伤,再结合提供的 NEBNext Ultra™ II 文库制备实验流程试剂,最终产生的高质量文库可从有限的测序数据中更灵敏地检测到 5-mC 和 5-hmC。
- 更卓越的 5-mC 和 5-hmC 检测灵敏度
- 更高的比对率
- 更均一的 GC 覆盖度
- 可从有限的测序数据检测到更多的 CpG 位点
- 更均一的二核苷酸分布
- 更高效的建库流程,更长的文库插入片段
- 转化模块可单独购买
使用 NEBNext UltraShear(NEB #M7634)可实现与 EM-seq 实验流程兼容的 DNA 酶法打断。
在我们的技术说明中查看或下载更多的性能数据。
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NEBNext 酶学转化法甲基化建库试剂盒提供了一种高性能的酶学方法,能够代替重亚硫酸盐转化,通过 Illumina® 平台测序来研究 DNA 甲基化。
DNA 起始量低至 10 ng,使用随附的 NEBNext Ultra II 试剂和经过优化的 EM-seq 接头来制备文库。随后,由 TET2 氧化 5-mC 和 5-hmC 提供保护,避免在后续步骤中被 APOBEC 脱氨基。相反,未修饰的胞嘧啶被脱氨基成尿嘧啶。随后使用 NEBNext Q5U®预混液(Q5® 超保真 DNA 聚合酶的改良版本)扩增文库,再使用 Illumina 仪器进行测序。
高效稳定的 EM-Seq 方法可地减少对 DNA 的损伤,再结合高效的 Ultra II 文库制备试剂盒,可从有限的测序 read 中更灵敏地检测 CpG 位点。
特性:
- 更卓越的 5-mC 和 5-hmC 检测灵敏度
- 更高的比对率
- 更均一的 GC 覆盖度
- 可从有限的测序 read 检测到更多的 CpG 位点
- 更均一的二核苷酸分布
- 更高效的建库流程,更长的文库插入片段
- 转化模块可单独购买
备注:以上仅为 E7120 的部分产品信息,如需NEB货号 E7120 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等,请通过NEB官网查找对应的货号获取。
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文献和实验.6)。 ( 4 ) 10% 过硫酸铵(APS) 水溶液。 ( 5 ) 四甲基二乙胺(TEMED)。 ( 6 ) 去离子甲酰胺。 ( 7 ) 固定分子质量大小的寡核苷酸,作为分子质量标准或短距离 DNA 标尺,如 100 个碱基梯度标尺(NEB 公司)。 ( 8 ) 6X 溴酚蓝上样缓冲液:70% (m/V) 的蔗糖溶液中加 0.25% (m/V) 的溴酚蓝。 ( 9 ) 溴化乙锭溶液:5 mg/ml EB 水溶液。 2.5 片段纯化 2.5.1 哌啶切割后的直接纯化
Raf 蛋白 Ras 结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆
性质的序列提供最多的选择。因此,发展构建文库的策略毫无疑问一直是这个领域的研究焦点。过去的文献,报道了一些将蛋白质中的某区域完全随机化或高度简并化的例子,以回答关于蛋白质折叠的问题 [ 9,10 ]。然而,关于真正建立高度简并文库,寻找编码新的折叠、结合能力或酶活的序列的报道仍很少见 [ 6,11] 。构建高度随机文库固有的以及随后在大量时序列库中寻找编码特定性质的少数序列的局限性,推进了新方法的设计和开发,这其中就包括 DNA 混编(DNA shuffling ) 策略或允许毫无序列相似性的基因间
?是我们要特别注意的。 复制子:通常表达载体都会选用高拷贝的复制子。pSC101类质粒是严谨方式复制,拷贝数低,pCoE1,pMBI(pUC)类的复制子的拷贝数高达500以上,是表达载体常用的。通常情况下质粒拷贝数和表达量是非线性的正相关,当然也不是越多越好,超过细胞的承受范围反而会损害细胞的生长。如果碰巧需要2个质粒共转化,就要考虑复制元是否相容的问题。 筛选标记和报告基因:氨苄青霉素抗性是最常见的筛选标记,卡那霉素或者是新霉素次之,通常是另一个载体的筛选标记用。四环素,红霉素和氯
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