- ￥129 - 458
- BioTNT
- A2010A011
- 上海
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 供应商：
上海普时如生物科技有限公司
- 保存条件：
2~8℃
- 规格：
1ml（100T）/5*1ml（500T）
| 规格： | 1ml（100T） | 产品价格： | ￥129.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5*1ml（500T） | 产品价格： | ￥458.0 |
（适用低ROX和无ROX仪器）
| 货 号 | 规 格 |
| A2010A011 | 1mL PCR mix，1mL DEPC 水 |
| A2010A011×5 | 5X1mL PCR mix，5X1mL DEPC 水 |
| 说明书 | 1份 |
产品介绍
本产品含有优化浓度的Fast HSTaq DNA Polymerase、SYBR Green I 、dNTPs 、Mg2+、 反应缓冲液和稳定剂等成分。Fast HSTaq DNA Polymerase 高温加热前，抗 Taq 单克隆抗体与 Taq 结合， 抑制 Taq 的聚合酶活性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板 DNA 非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。 抗体在 PCR 反应的预变性步骤中已完全失活，不会阻碍之后 Taq 酶聚合反应，大大提高了 PCR 反应的灵敏度及特异性。优化浓度的 SYBR Green I 荧光染料掺入 DNA 双链后，荧光信号增强，而不掺入链中 SYBR Green I 染料分子荧光信号不变， 从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步，荧光可以在退火或延伸阶段测定。
本产品为 2×浓度预混实时荧光定量快速 PCR 反应体系（含 Low ROX），使用时只需加入模板、引物和水，使其工作浓度为 1×，即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度地减少人为误差、节约 PCR 实验操 作时间、降低污染几率。
使用说明
1、从冰箱中取出本产品，室温融化后轻轻震荡混匀，1000rpm简短离心10–15秒。
2、 qPCR反应体系配制：
| qPCR反应体系 | 体积 (μL) | 终浓度 | 备注 |
| qPCR Premix(2X) | 10 | BioTNT A2010A011 | |
| 上游引物(10μM) | 0.4 | 0.2μM | 可由引物初始浓度调整 |
| 下游引物(10μM) | 0.4 | 0.2μM | 可由引物初始浓度调整 |
| 样本cDNA/阳参/阴参 | 1 | 待检样品 | |
| RNase-free 水 | 5 | 补足总体积20μL | |
| 总体积 | 20 |
3、使用本产品进行qPCR实验可广泛应用在市场现存的以下各种qPCR仪器:
不需要ROX校正的仪器：Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。请在分析的时候 passive reference 选择None；
需要Low ROX校正的仪器：ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio 3 System，QuantStudio 5 System，QuantStudio 6 Flex System，QuantStudio 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。请在分析的时候 passive reference 选择ROX；
需要High ROX校正的仪器：ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。请购买biotnt的A2010A012 货号产品。
| 操作步骤 | 两步法反应条件* | 三步法反应条件** | |||
| 温度 | 时间 | 温度 | 时间 | ||
| 预变性*** | 95℃ | 5 minutes | 95℃ | 5 minutes | |
| 40个循环 | 变性 | 95℃ | 5 seconds | 95℃ | 5 seconds |
| 退火 | 60℃ | 30 seconds | 55℃ | 20 seconds | |
| 延伸 | 72℃ | 20 seconds | |||
| hold | 4℃ | hold | 4℃ | hold | |
** 当引物Tm值<60℃，扩增产物>300bp时，推荐三步法反应条件；
*** 本mix 采用的是hot start 抗体taq酶，该酶保证了Real-Time PCR实验的特异性，并降低了实验操作难度（反应液配制时不需要在冰上操作，加样时间即使比较久，非特异性反应很少），必须有95℃ 5分钟这一步，否则会导致后面的反应不能进行，没有信号检测出；
自备设备和试剂
1、模板：cDNA，基因组DNA，质粒DNA，噬菌体DNA；
2、上下游引物，推荐BioTNT® Preci® mRNA qPCR Primer Pair；
3、BioTNT® Preci® qPCR Positive Control
4、RNase-free Water；
5、96孔或384孔PCR板；0.2mL或 0.5mL Eppendorf管（无菌、无酶、RNase-free）；
6、移液器（10μL、200μL规格）及RNase-free Tips（10μL、200μL的枪头）；
7、Real-Time PCR仪；13000rpm离心机；
PCR结果判断
1、扩增曲线为s型，如下图所示：
2、熔解曲线为单峰，且峰的Tm值与产物理论Tm相差在±2℃以内，如下右图所示：
注：引物设计软件报告会通过计算CG含量以及序列位置得到理论Tm值，实验所得熔解曲线峰所对应的Tm值会因为仪器的不同而变化，但变化不会超过±2℃，如果相差过大，可能并不是目的基因的产物。
运输与储存
1、冰袋或干冰运输，收到后立即贮存于–20℃。
2、-20℃储存, 有效期为6月。
3、可多次冻融。不多于6次冻融。
质量标准（QC）
经BioTNT BALB/c小鼠核酸通用PCR阳性模板验证合格的基因引物，其适用于几乎所有BALB/c小鼠样本的PCR扩增，并且其熔解曲线呈特异性单峰，可以相当准确地显示目的基因的表达水平。如果客户的引物经本产品验证不合格，推荐您购买BioTNT引物，为您节省很多宝贵的精力和时间。
技术支持
1、BioTNT为其所提供的技术支持质量和效率而自豪。技术支持部门在样品及检测领域及对BioTNT产品具有丰富的实践经验和充足的理论知识。如果您PCR或其它产品有问题或遇到困难，请联系我们，无需迟疑。
2、BioTNT客户是我们产品改进和特殊应用信息的主要来源。您所提供的信息对于BioTNT的研究人员很有帮助。当您对产品性能或新的应用及新的技术有任何建议时，我们希望您能及时联系我们。
3、有关技术支持和更多信息，请联系BioTNT技术支持部门。
BioTNT配套试剂
| 品 名 | 货 号 | 规 格 |
| BioTNT® Preci® mRNA qPCR Primer Pair | PRIM1 | 500 test |
| BioTNT® Preci® qPCR Positive Control | 20uL | |
| RNA 极速抽提试剂盒 | A2010A110 | 50T |
| TRIzol® RNA提取试剂盒 | A2010A0401 | 50T |
| cDNA第一链合成RNA逆转录试剂 | A2010A0601 | 50T |
注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作。
2、如需更详细信息，请向产品供应商咨询相关的材料安全数据书。
使用限制
本产品只用于分子生物学研究。不能应用于诊断、预防和治疗疾病。
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文献和实验后续实验的进行。 小编以前做实验的时候一般是选用 Nanodrop 仪器进行检测，该仪器使用非常方便，不需要对样品进行稀释，并且具有非常宽的 RNA 测量范围。还有一些同学会使用传统紫外分光光度法或者梯度点样用琼脂糖凝胶电泳进行粗略检测，但这两种方法不仅准确度较低，而且紫外分光光度法对样本的消耗也较大，并不是很推荐哦。 2. 去除基因组 DNA 的污染很重要 RNA 中存在的基因组 DNA（gDNA）污染可能是最终 PCR 反应中假阳性结果出现的原因。一方面我们可以通过设计跨内含子的引物去除
时发现，这个实验其实是有扩增的，但原本应该平直的 ROX 荧光曲线却呈现出一个跟 SYBR 颠倒对称的图形（图 12B）。我们查看 Raw data 时发现其第一通道荧光（FAM）是正常上升的，第四通道荧光（ROX）也是维持在正常水平，这就怀疑可能与校准文件异常有关。这台仪器在重新做了 SYBR 荧光校准以后，扩增曲线就恢复正常了，也能得到正常的 CT 值。 图 12 校准文件异常导致曲线异常 关于扩增曲线异常的更多案例分析可以参考我们之前的推文《荧光定量 PCR 异常扩增曲线分析攻略
信号不重叠干扰，能够区分清楚。现已发现的荧光基团种类有限，满足这样条件的分子组合更少。目前的最佳组合只能达到每组4到5种荧光的水平。 第三是实验方案的设计和选用的探针类型。定量PCR实验必须使用ROX校正荧光，占去一种荧光；TaqMan探针的淬灭基团(TAMRA)也要占用一种荧光，对于4色检测的仪器来说，只剩下2种荧光可以标记探针，对于5色检测的仪器还有3种荧光可以使用。如果将探针改用TaqMan MGB探针，由于它的淬灭基团是不发荧光的，比之TaqMan探针就可以多1种荧光用于标记探针。如果实
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