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- 2026年01月06日
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亚硫酸氢盐处理后测序（bisulfite sequencing PCR,BSP）法是检测基因甲基化的经典方法，其原理为：用亚 硫 酸 氢 钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶（C）被转化为尿嘧啶（U）而甲基化的胞嘧啶则不变。
基因组DNA经亚 硫 酸盐处理后，设计BSP引物扩增目的片段，此时尿嘧啶（U）全部转化为胸腺嘧啶（T），最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化。
一、技术优势：
（1）检测序列长，可长达200-400bp；
（2）分辨率高，可检测到每一个碱基的甲基化状况；
（3）对于样品要求低，适用于新鲜、冷冻和FFPE样本。
二、服务内容：
（1）基因组DNA的Bisulfite转化；
（2）BSP（Bisulfite Sequencing PCR）法，包括引物设计与合成，TA克隆测序及数据分析。
三、样品要求：
（1）若提供基因组DNA，需≥2μg；
（2）若提供的材料为新鲜组织、血液、细胞等生物材料，需提供足够提取2μg以上基因DNA的材料量；
（3）基于所选择的DNA甲基化检测方法，需提供相应的引物或引物序列。
四、BSP服务完成时提供：
（1）Bisulfite处理的基因组DNA；
（2）实验报告(包括BSP产物的直接测序报告)；
（3）5个有效的阳性克隆；
（4）空点图。
五、结果展示：
（1）BSP测序图：
（2）BSP点状图和BSP序列比对：
（3）BSP柱状图：
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文献和实验最近因为发现一个gene在多种肿瘤中被silenced, 我也在做DNA甲基化. 这里把我折腾1个月的经验和大家分享1. Genomic DNA extraction这一步其实也很重要,尤其是对tissue来说. 大家知道DNA hypermethylation会导致chromatin结构紧密, 所以这一步尽量去除DNA结合的蛋白很重要. 我们实验室常用Qiagen的两个kits效果都不是太好,最后还是用proteinase K处理后酚提醇沉效果最好, 产率高纯度好.2. bisulfite
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做了点甲基化研究，从头下来，也有一点点体会。也看了院子里不少牛人的新的体会。本人将每一个步骤的具体操作、每个操作的具体注意事项和心得进行初步总结，慢慢叙来，抛砖引玉，欢迎拍砖。 做到现在，有成功的喜悦，也有失败痛苦，且行且歌，总得来说，BSP/MSP，想说爱你不容易。 如有时间，想谈谈：BSP/MSP引物设计；基因组海量甲基化数据分析；MSP设计及操作；当前MSP的研究进展，等等吧…… 1. 确定目的基因后，登陆一下网址：http://genome.ucsc.edu
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