扩增子测序类项目

（一）原样类 一、动物类样品： 1.粪便： 

用灭菌的 2.0mL 离心管保存，单个样本取样量：0.5-1.0g/管，如不能及时送样，请-80 摄氏度冰箱冷冻保存。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5 管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

注：如粪便样品量较多或不能马上收集，最迟要在 2 小时之内全部收集完。

2.肠道内容物： 

用无菌手术刀刮取或镊子挤出内容物，用灭菌的 2.0mL 离心管保存，单个样本取样量：0.5-1.0g/管，如不能及时送样，请-80 摄氏度冰箱冷冻保存。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5 管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

3.肠道组织： 

新鲜的组织样本用无菌磷酸盐缓冲液（1*PBS，PH=7.2）轻轻清洗，直到没有内容物流出；用无菌的显微镜玻片刮取附着在表面的组织微生物，用灭菌的 2.0mL 螺口 EP管保存，液氮速冻 15min 以上，如不能及时送样，请-80 摄氏度冰箱冷冻保存。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5 管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

4.生殖道样本： 

消毒外阴或尿道口，无菌棉签拭子拭取宫颈口或宫颈后穹窿的分泌物，不可碰及阴道壁，圆周滚动 5 次，充分取样，用无菌剪刀剪下棉签头部，放入装有 Amies 培养基的无菌离心管中，如不能及时送样，请-80  摄氏度冰箱冷冻保存。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5 管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

5.唾液样本： 

用灭菌的 2.0ml 离心管，每管收集 1~2ml，-80 摄氏度冰箱冷冻保存。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5 管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

二、环境类样品： 1.土壤样本： 

用灭菌的 2.0ml 离心管或小自封袋，每份 0.5~2g，如不能及时送样，请-80 摄氏度冰箱冷冻保存。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5 管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

注：土壤类样品，应避免送样过多，造成保存空间紧张。

2.水体样本（含污水、尿液等液态样本）： 

水样需要通过相应孔径的滤膜进行过滤，过滤后微生物会截留在滤膜上，将滤膜置于离心管中，如不能及时送样，请-80  摄氏度冰箱冷冻保存。由于材质问题，冷冻后的滤膜较脆易碎，建议冷冻时间不要太久，尽快送样。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5  管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

注：微孔滤膜建议使用 0.45μm 和 0.22μm 孔径，0.45μm 富集真菌类或者直径更大的微生物；0.22μm 富集细菌类或者直径更大的生物，可根据科研需要选择合适孔径的滤膜。

3.植物内生菌样本： 

随机摘取实验需要的新鲜植株，于 24h 内进行表面灭菌处理；先用 75%酒精浸泡 1 min，然后转入 2.5%次氯 酸 钠溶液中浸泡 5-10  min，接着用无菌漂洗 2-3 次，收集最后一次漂洗液，涂布平板，无菌长出即为表面灭菌彻底；装入小自封袋，每份 5-10g，如不能及时送样，请-80 摄氏度冰箱冷冻保存。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5  管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，并确保寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

备注：植物类样本要求备注清楚：提取植物内生菌或表面菌。

三、食品类样品： 1.固体类： 

总量>20g，用灭菌的 2.0ml  离心管分装，如不能及时送样，请-80  摄氏度冰箱冷冻保存。为保证实验顺利进行，每个样本取 3-5 管备份，寄送样本时选择干冰或足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，样品仍处在冷冻状态。

2.液体类： 

液态类建议进行过膜处理后按照水体送样进行，无条件时可进行原样送样，总体积 30-50ml，用 50ml 离心管分装， 4 度冷藏保存，足量冷冻冰袋运输，寄送到公司时，冰袋仍处在冷冻状态。

注意：

1.为避免送样量不足，导致的提取总量不足问题，我们希望合作方送样量不低于最少送样量，最好达到推荐送样量的标准，以避免需要反复提取而样本不足的情况，因此导致反复送样而出现周期延误的状况。

2.液态类的样品，必须用冰袋寄送，超出送样标准规定范围之外的送样方式，可事先沟通解决！

具体原样送样量标准见下表： 送样原则：干净、足量、安全 

核酸类 一、核酸质量标准： A.DNA： 

DNA 样品送样前，请做浓度和凝胶电泳检测，对提取的DNA 有一定的了解，以便后续实验沟通；为了实验顺利进行请按如下标准提供样品：

1）浓度大于 10ng/μl（浓度以 Nanodrop 为准）；

2）检测 260/280 比值控制在 1.8-2.0 之间，在 260 波长有明显的吸收峰；

3）客户提供的胶图中，电泳必须要有条带；

4）DNA 体积不少于 25 μL，如果扩增多个基因区域，每增加一个扩增区域，增加 10μl。

B.PCR 产物: 

送来的PCR 产物：分两大类：

1.包数据量（G）：

送样要求：送样体积大于 25μL；*订单上标记是否纯化；*提供片段大小；*建库类型-必填（如：试剂盒建库，PCR-free  文库）；PCR-FREE  文库(浓度≥1ng/ul，总量≥3ug)，试剂盒建库(浓度≥1ng/ul，总量≥1.2ug)；扩增胶图；Barcode 信息等。

2.常规包 reads（条）：

未纯化：

送样体积大于 25μL；*订单上标记是否纯化；*提供片段大小；Barcode 信息；建库类型-必填（如：常规建库）；扩增胶图等。

已纯化：

1）必须是凝胶电泳，切胶回收后的PCR 产物，其它回收可能含有非目的条带；

2）纯化后样品浓度≥1 ng/μl，总量≥30ng（荧光定量为准）；

3）体积≥25 μL；

4）必须提供片段大小，扩增回收后检测胶图等信息；

5）客户提供的胶图中，电泳必须要有目的条带；

备注：若是未纯化样品，需要纯化时，另收费。

（三）文库类 

1、峰型单一，无杂峰，无接头和无引物二聚体，QPCR 浓度≥3nM 体积≥25uL；

2、备注是否添加Phix 及Phix 的占比。

（四）拒收样品 

1.直径大于 3cm 的石块。

2.由于保存不当，样品包装破裂，发生交叉污染的样品。

3.提供的核酸样品体积小于 20uL。

4.提供的送样管为 0.2ml 的 PCR 反应管，标记不清易丢失。