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- 2026年01月04日
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原核蛋白表达系统是迄今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统，能快速表达纯化各种不同来源蛋白。所制备的重组蛋白可用于药物筛选、结构生物学研究、细胞生物学研究、蛋白质组学研究等的一系列生物医学领域的研究。科沿有道拥有完整的杆菌原核表达技术平台：根据客户的需求，提供从质粒构建，基因表达，蛋白纯化等一系列服务。
★ 服务内容：
1.靶基因序列设计，密码子优化；
2.靶蛋白 cDNA 阅读框的设计和全长基因合成；
3.表达载体的构建；
4.质粒的转化和高表达菌株的筛选；
5.转化菌摇瓶培养，诱导表达；
6.目标蛋白纯化；
7.SDS-PAGE 检测表达及纯化情况。
★ 需要提供的信息：
1.提出具体可行的实验方案提供含有目的基因序列；
2.确认的质粒或带有此质粒的菌株提供测序确认的目的基因 PCR 产物；
3.提供目的蛋白编码基因信息（序列或 NCBI 登陆号），一起分析后提出具体可行的实验方案并付诸实施。
★ 服务周期：
20 个工作日。
★ 结果内容：
1.初步的培养条件和合理的纯化工艺，纯化后的蛋白。
2.SDS-PAGE 蛋白电泳结果。
3.详细的实验报告（包括实验方法，步骤，照片，相关数据、SDS-PAGE 及质粒测序结果等）测序彩色波形图，测序方向图，序列碱基图，酶切位点图，含有目的基因的质粒及甘油菌。
★ 客户须知：
1.需要提供尽量详细的背景资料。
2.如果提供给我们质粒或 PCR 产物，需要提供给我们测序结果峰图。
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文献和实验最近2个月都在做原核表达，刚开始什么都不会，连SDS-PAGE都跑成模糊的一片，其中的辛酸只有自己知道，现在实验慢慢上正轨了，自己也积累了一些经验。很怀恋之前探索的那段时光，现在把我做蛋白表达的过程和一些问题写出来，希望能够帮助开始做蛋白表达的人少走一些弯路。 1、表达载体的构建构建表达载体是比较简单的，不过也是需要对你的蛋白还有所用的载体有一个详细的认识，对于比较大的蛋白最好选用能够助溶的标签，但是也不是固定的，比如我的蛋白有65-70KD，我也用的也是HIS，上清也是有少量表达。最关键
最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正。 1. 首先介绍一下背景。载体是invitrogen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是该公司的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。 2. 第一次失败。第一次做诱导的时候，重复了很多次，但总是诱导不出来。PCR，酶切都正确。但没等测序结果出来就开始做了。失败了。曾在园子求助。后来证明是引物
表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然，它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性过高等缺点。原核表达从一开始的设计就非常重要，所谓好的开始是成功的一半。做足准备功夫，可是省去很多将来后悔的事情。首先，我们要根据是否要求可溶将载体分成两大类，如果希望
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