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Invitrogen
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2mL
台盼蓝是一种长期广泛使用的鉴定死细胞的方法。染料不能对细胞膜完整的细胞进行染色,只能对细胞膜受损的死细胞进行染色。台盼蓝染色法适用于 Countess 系列自动细胞计数仪,在这些仪器上适合使用 0.4% 台盼蓝溶液。
备注:经常会在台盼蓝中发现沉淀物,一般会随储存时间延长和冷冻程度加大而增加。以下3种方法可能有助于尽量减少细胞计数样品中的台盼蓝沉淀:
1.用 0.3 微米过滤器无菌过滤台盼蓝
2.离心或被动沉降(避免混合或涡旋台盼蓝储备液)
3.将 1 mL 台盼蓝溶液缓慢加热至 37°C 持续10分钟。
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文献和实验/min,待肝脏膨胀后迅速剪断下腔静脉, 灌流15min; c. 前灌流液灌流完后,立即灌流后灌流液T2(37℃下预热),流速3ml/min,5-10min; d. 取下肝脏,置于平皿中,冰上剪碎肝组织,200目滤网过滤;用基础培养基清洗网上组织; e. 收集滤液,600rpm 离心2min;重复一次; f. 弃上清,往沉淀中加2ml完全培养基,重悬细胞后,台盼蓝染色计数,将细胞接种至鼠尾胶原包被的25cm2培养瓶中,37℃ 5%CO2培养箱中培
基本原理:本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法,主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作,且使用通常的实验设备即可完成。试剂与器材1)外周血单个核细胞2)1×PBS和10×PBS(无Ca2+、Mg2+,0.5mM EDTA),胎牛血清(56℃,30分钟加热灭活),HCl 1mol/L。Percoll分层液(密度=1.130g/ml,商品),4g/L台盼蓝染液(溶解在PBS液中)。3)50ml聚丙烯圆锥管,毛细吸管,移液管(1、2、10ml)。4)CO2
单核细胞的分离基本原理本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法,主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作,且使用通常的实验设备即可完成。试剂与器材·外周血单个核细胞(参见实验1) ·PBS1×和PBS10×(无Ca2+、Mg2+),含0.5mM EDTA ·胎牛血清(56℃,30分钟加热灭活) ·HCl1mol/l ·Percoll分层液(密度=1.130g/ml,商品) ·4g/l台盼蓝染液(溶解在PBS液中) ·50ml聚丙烯圆锥管 ·毛细
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