检测服务丨细胞HE染色实验

细胞HE染色实验

HE染色，全称为苏木-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining），运用组织成分酸碱特性与染料选择性的差异，实现了对组织细胞多样成分的精确区分与形态结构的鲜明展示。此方法广泛应用于病理学领域，用于观察病变组织的特点和变化，包括但不限于细胞形态、组织结构等，为疾病的诊断与研究提供了强有力的视觉依据。

一、染色原理：

HE染色基于组织成分的酸碱性质与染料亲和力差异。

在pH约6的染色条件下，DNA的负电荷磷酸基团吸引苏木的正电荷，形成蓝色细胞核。

伊红则以其负电荷阴离子与细胞质内蛋白质的正电荷阳离子结合，染成不同程度的红色或粉红色，形成与蓝色细胞核的鲜明对比。

通过调整染色液pH值，可改变物质的染色性质，进一步证明酸碱度对染色反应的影响。HE染色通过这一原理，清晰区分并展示了组织细胞的不同成分及其形态结构特点，是病理诊断中的基础且关键的染色技术。

二、材料与仪器：

实验试剂：

无水乙醇、二甲苯、伊红染液、苏木素染液、酸性乙醇分化液、返蓝液、PBS缓冲液、中性树胶

实验仪器：

载玻片、盖玻片、OLYMPUS CKX43-LP显微镜、3DHISTECHP250FLASH全景扫描仪

三、实验步骤：

1、实验样品的制备：

将细胞接种于合适的培养板中（一般为24孔板或6孔板），使染色前细胞的融合度达到70%-80%，用PBS洗涤3次。

2、实验样品固定：

用乙醇固定样品20分钟，然后用PBS洗涤两次，每次1分钟。

3、细胞核染色：

Harris苏木素染5-10min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗10分钟，蓝化液返蓝5分钟，流水冲洗。

4、细胞质染色：

伊红染液中染色1-3min。自来水洗。

5、脱水透明封片：

无水乙醇快速脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 

※实验结果示例：

正常情况下，苏木素染细胞核为蓝色，细胞质着色为粉红色。

四、注意事项

1、调节pH值：

染色过程中，调节溶液的pH值至关重要。长时间在福尔马林中固定的组织容易酸化，影响细胞核的着色。因此，在染色前，应确保组织块在自来水中充分冲洗，或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，以中和酸性，使细胞核着色更深。

染伊红时，如果胞浆着色不佳，可以尝试在伊红溶液中滴加1-2滴b醋酸，有助于改善胞浆染色效果。

2、分色控制：

切片染苏木后，分色步骤是确保细胞核清晰染色的关键。应在显微镜下进行精细控制，目标是使细胞核染色清晰而细胞质基本无色。若分色过度，会导致染色过浅，需重新染色后再行分色。

3、封固步骤：

最后封固时，应使用中性树脂，以防止切片日后褪色。盖玻片的选择应大于组织块的面积，以确保完全覆盖。封固过程中，要注意树脂的浓度要适当，避免产生气泡，这些气泡会影响观察并可能加速褪色。