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- 碧云天（beyotime）
- 国产
- L01525
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
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零下20℃
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至少一年有效
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现货
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 规格：
5µg
pLenti-CDK4-sgRNA (CDK4基因敲除质粒)是一种在动物细胞中可以同时表达Cas9、目的基因的sgRNA和puromycin抗性基因的质粒。用于在动物细胞中直接基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因，或者通过包装慢病毒后基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因。本质粒中sgRNA的有效性已经通过T7EI法的验证。
本质粒在细菌中为Amp抗性，全长约13,000bp。本质粒的关键图谱信息请参考图1。本质粒可直接转染细胞用于目的基因的CRISPR/Cas9敲除，以及通过puromycin筛选稳定细胞株；也可以与pMDLg、Rev及VSV-g共转HEK293T细胞进行重组慢病毒(lentivirus)的包装，然后再用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。
图1. 表达sgRNA、Cas9和puromycin抗性的pLenti-sgRNA质粒关键图谱信息。
本质粒中的sgRNA基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA快速筛选和验证体系获得，sgRNA的有效性已经通过T7EI法验证。
本质粒用于实验时，建议同时选购无任何靶向的对照质粒pLenti-Control-sgRNA (L00011)或靶向GFP的对照质粒pLenti-GFP-sgRNA (L00013)。
碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的CDK4基因敲除的质粒(L01525 pLenti-CDK4-sgRNA)、慢病毒(L01526 CDK4 Knockout Lentivirus)、HEK293T细胞(L01527 CDK4 Knockout HEK293T Cells)、HEK293T敲除细胞的RIPA裂解液(L01528 CDK4 Knockout HEK293T RIPA Lysate)、HEK293T敲除细胞的Trizol裂解液(L01529 CDK4 Knockout HEK293T Trizol Lysate)等产品，具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。
CDK4基因的基本信息如下：
| Species | Gene Symbol | Gene ID | GenBank Accession | Transcript |
| Human | CDK4 | 1019 | BC003644 | NM_000075 |
| About the gene | |
| Official Symbol | CDK4 |
| Previous Symbol | - |
| Official Full Name | cyclin dependent kinase 4 |
| Synonyms | PSK-J3 |
| Location | 12q14.1 |
| Gene Type | protein-coding gene |
| Uniprot ID | P11802 |
| Pathway/Library | Cancer Target Genes Library; Kinases Library; Cell Cycle Pathway Genes Library |
| Gene Summary | The protein encoded by this gene is a member of the Ser/Thr protein kinase family. This protein is highly similar to the gene products of S. cerevisiae cdc28 and S. pombe cdc2. It is a catalytic subunit of the protein kinase complex that is important for cell cycle G1 phase progression. The activity of this kinase is restricted to the G1-S phase, which is controlled by the regulatory subunits D-type cyclins and CDK inhibitor p16(INK4a). This kinase was shown to be responsible for the phosphorylation of retinoblastoma gene product (Rb). Mutations in this gene as well as in its related proteins including D-type cyclins, p16(INK4a) and Rb were all found to be associated with tumorigenesis of a variety of cancers. Multiple polyadenylation sites of this gene have been reported. |
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文献和实验3 篇 Nature 连发，解决世纪难题，周期蛋白的毁灭调控蕴含癌症患者的新生
CDK4/6 抑制剂 Palbociclib (帕博西尼) 敏感性的基因，从而更好的理解细胞周期的调控网络。 图片来源：Nature研究人员通过全基因组筛选发现有数百个基因敲除影响了帕博西尼的易感性，其中 AMBRA1 基因缺失变化最为显著。随后发现 AMBRA1 缺失会导致细胞和小鼠体内 cyclin D 表达增加，从而促进细胞增殖并降低对 CDK4/6 抑制剂的敏感性。AMBRA1 作为 CRL4 复合物的特定受体，调控了 cyclin D 的泛素化和蛋白酶体降解
CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
前期记录先确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- 目标基因背景调查设计 sgRNA 及引物CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后对前期文章的补充：设计 sgRNA 之后，需要对结果进行判断：但为什么 0.7044 分数的哪一个没有选，我也不知道为什么，总感觉他们的顺序不是随意的排的。或许有人能解答一下为什么。顺手把设计工具的解说放上
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室，CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复，其实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来，研究人员发现，它似乎是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步：1. 确定待敲除基因的靶位点；2. 设计识别靶位点识别的一对
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