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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
30
- 英文名:
4-Hydroxybenzyl cyanide
- CAS号:
14191-95-8
- 供应商:
上海莼试
- 保存条件:
Store at -20°C
- 规格:
500mg
| 产品名称 | 4-Hydroxybenzyl cyanide | 产品货号 | CS-01Y63567 |
| 规格 | 500mg | CAS号 | 14191-95-8 |
| 含量 | >98.00% | 分子式 | |
| 分子量 | 133.15 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
4-Hydroxybenzyl cyanide规格:500mg
CAS:14191-95-8
别名:N/A
化学名:N/A
分子式:
分子量:133.15
溶解度:N/A
储存条件:Store at -20°C
General tips:For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
产品描述:
4-Hydroxybenzyl cyanide is an endogenous metabolite.
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
公司正在出售的产品:
| H-D-Ala-OtBu.HCl | N-(2-hydroxyethyl)-Naphthalimide |
| Tempo | 人磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒 |
| Metformin | 人磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)试剂盒 ELISA |
| 3α-Hydroxymogrol | 人葡萄糖氧化酶(GOD) ELISA Kit |
| TGX-221 | 人乙酰胆碱酯酶(AChE) ELISA检测试剂盒 |
| Miriplatin (SM-11355) | 人酪氨酸羟化酶(TH) ELISA试剂盒 |
| NVP-QAV-572 | 人多巴胺脱羧酶(DDC) 试剂盒 ELISA |
| Oxaliplatin | 人非神经元性烯醇化酶(NNE) ELISA检测试剂盒 |
| GSK2269557 | 人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA Kit |
| N-Nitroso-N-methylurea | 人胶原酶I(Collagenase I) ELISA检测试剂盒 |
| 1-Deoxynojirimycin (hydrochloride) | 人胶原酶II(Collagenase II)试剂盒 ELISA |
| Triazavirin | 人α烯醇化酶(αENOL) ELISA试剂盒 |
| NSC 632839 hydrochloride | 4-Hydroxybenzyl cyanide人胰淀粉酶(PAMY) ELISA Kit |
| Cefpirome sulfate (HR-810 sulfate) | 人血管紧张肽酶A(ATA) ELISA检测试剂盒 |
| 人补蛋白9ELISA试剂盒 | 人天青杀素(AZU) 试剂盒 ELISA |
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验氰化氢( HCN)的盐 M′ CN。在发现 HCN也存在于宇宙空间中的同时,据 S. Miller实验指出它是通过放电从甲烷、氨、水生成氨基酸时的中间产物。因此认为它是生物以前的有机物生成中的重要中间产物。实际上,通过以氨和水溶液加热而生成腺嘌呤。虽 HCN在生物体内的存在并不多。但它可经苦杏仁苷酶水解而生成。能和金属原子形成非常好的络会物,因此易和金属蛋白质结合,常常显著地抑制金属蛋白质的机能,尤其是对细胞色素 C氧化酶,即使 10-4 M浓度,也会强烈地抑制,因而使呼吸停止,毒性很强
抗氰呼吸(cyanide-resistant respiration)
当植物体内存在与细胞色素氧化酶的铁结合的阴离子(如氰化物、叠氮化物)时,仍能继续进行的呼吸,即不受氰化物抑制的呼吸。许多植物组织可以进行,一些真菌和绿藻、少数细菌和动物也可进行,但绝大多数动物不能进行。它在呼吸链(电子传递链)上,从泛醌分叉,电子不经过细胞色素系统,即不经过磷酸化部位Ⅱ及Ⅲ,直接通过另一种末端氧化酶——交替氧化酶传递到分子氧,故形成的ATP少。要得到与呼吸链的主链产生同样多的ATP,就需消耗较多的底物,这样呼吸作用加速,放出的热能也多。对其生理功能,了解甚少
氰化物不敏感性呼吸 cyanide insensitive respiration
在通常的呼吸中,与氧直接反应的有细胞色素氧化酶,由于该酶的Ⅲ价铁与氰化物结合而反应受到抑制,所以在高浓度( 0.001M程度)的氰化物存在下,呼吸可完全受抑制,这种呼吸称为氰化物敏感性呼吸,几乎所有动物组织中的呼吸都是这种类型。但是,许多植物和一部分动物,即使遇到高浓度的氰化物,呼吸并不完全受抑制。这一事实表明,是由于存在着细胞色素氧化酶以外的氧呼吸系统,将这种呼吸称为氰化物不敏感性(抗氰化物性)呼吸。氰化物不敏感的原因,可归结为羟乙酸氧化酶、氨基酸氧化酶等黄素系氧化酶的存在。显有非常高
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