Recombinant Human IKBKB

商品属性：

货号	XG-DB2336	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	296-435
分子量	36.4 KDa	标签	N-terminal His-IF2DI Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：I kappa B kinase 2, I kappa B kinase beta, IKBKB, IKK B, IKK beta, IKK2, IKKB, IκB, NFKBIKB  纯度 Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
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m-TGE 肉汤 m-TGE Broth 250 用于奶制品中滤膜细菌计数(Acumedia方法)  Mast Cell Chymase 肥大细胞类糜蛋白酶1 0.5mgMast Cell Chymase 肥大细胞类糜蛋白酶1
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LB肉汤(Miller) 250 用于基因工程菌大肠杆菌培养  CSNK2A2 Protein Human 重组人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白
PAC斜面培养基250g用于弧菌的保存  ENPEP Protein Mouse 重组小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 蛋白 (His 标签)
Ironbacteriamedium  SELP重组小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白 (His 标签) Protein
葡萄糖酪胨琼脂 Dextrose Casein-peptone Agar 250 用于食品中腊样芽胞杆菌鉴定和计数(APHA方法)  红细胞补体受体1(CR1)重组蛋白 Recombinant Complement Receptor 1, Erythrocyte (CR1)
山梨醇麦康凯半固体培养基250g/瓶用于O种保存incubationmedia山梨醇麦康凯半固体培养基250g/瓶用于O种保存  TSPAN7重组人 TALLA-1 / TSPAN7 蛋白 (His 标签) Protein
孟加拉红培养基平板(9cm) 10个/包 用于食品中霉菌及酵母菌总数测定  CSNK2A2 Protein Human 重组人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 标签)
40%尿素水5ml*尿素酶琼脂基础  IL17A Protein Marmoset 重组绒猴 IL17 / IL17A 蛋白
Ironbacteriamedium  CXADR重组人 CXADR / CAR 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose Agar 250 用于大肠杆菌固体平板测定,肠道菌选择性分离  /离子转运ATP酶β3肽(ATP1β3)重组蛋白 Recombinant ATPase, Na+/K+ Transporting Beta 3 Polypeptide (ATP1b3)
H培养基250g/瓶用于植物组织培养incubationmediaH培养基250g/瓶用于植物组织培养  DCUN1D2重组人 DCUN1D2 蛋白 (His 标签) Protein
含225mlGN增菌液均质袋 10个/包 用于志贺氏菌前增菌培养  CSRP1 Protein Human 重组人 CSRP1 蛋白 (His 标签)
60g/L氯蛋白胨肉汤250g用于副溶血性弧菌的前增菌培养(SN标准)  HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
Recombinant Human IKBKBIron琼脂 250g 用于产  CD55重组小鼠 CD55 / DAF 蛋白 (His 标签) Protein
mTSB肉汤 mTSB Broth With Novobiocin 250 用于0157选择性增菌(ISO方法)  白介素2受体β(IL2Rβ)重组蛋白 Recombinant Interleukin 2 Receptor Beta (IL2Rb)
嗜冷菌计数琼脂250g/瓶用于乳及乳制品中嗜冷菌菌落总数的测定(ISO)incubationmedia嗜冷菌计数琼脂250g/瓶用于乳及乳制品中嗜冷菌菌落总数的测定(ISO)  ERH重组人 ERH / DROER 蛋白 (His 标签) Protein
基因工程大肠杆菌培养基  CST1 Protein Human 重组人 Cystatin SN / CST1 蛋白 (His 标签)
L-酪酸营养琼脂配套试剂SR0580L-酪酸营养琼脂基础配套试剂  COLEC12 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CLP1 / COLEC12 蛋白 (His 标签)
重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

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