Recombinant Human IGFBP3

● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2325	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	120-244
分子量	15.9 KDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：Acid stable subunit of the 140 K IGF complex, Binding protein 29, Binding protein 53, BP 53, BP53, Growth hormone dependent binding protein, IBP 3, IBP-3, IBP3, IBP3_HUMAN, IGF binding protein 3, IGF-binding protein 3, IGFBP 3, IGFBP-3, IGFBP3, Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3, Insulin-like growth factor binding protein 3 precursor, Insulin-like growth factor-binding protein 3  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
K'smediumacidification  ACVR1重组狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 (His 标签) Protein
DNA酶琼脂 DNase Agar 100 用于核糖核酸酶检测  NRF-1(nuclear respiratory factor-1 0.5mgNRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原
缓冲MUG琼脂2000ml/瓶用于滤膜法测定大肠杆菌incubationmedia缓冲MUG琼脂2000ml/瓶用于滤膜法测定大肠杆菌  NTRK1重组人 TrkA / NTRK1 蛋白 (aa 285-413, His 标签) Protein
血平皿(9cm) 10个/包 用于一般细菌的分离、培养和溶血试验  CXCL14 Protein Human 重组人 CXCL14 / BRAK 蛋白
aClTrypticSoyBroth  IL36G Protein Mouse 重组小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白 (His 标签)
K'smediumacidification  HA重组甲型流感 H3N2 (A/Wisconsin/67/X-161/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein
胰蛋白胨胆盐琼脂 Tryptone Bile Agar 250 用于大肠杆菌的膜过滤法选择性培养(ISO标准)  Rho C(Ras homolog gene family member C 0.5mgRho C(Ras homolog gene family member C) RhoC抗原
incubationmedia  EFNA3重组人 Ephrin-A3 / EFNA3 / EFL2 蛋白 (Fc 标签) Protein
3%NaClAlkalinePeptoneWater  CXCL3 Protein Human 重组人 CXCL3 / GRO gamma 蛋白 (His 标签)
T250g用于菌的培养(SN标准)  ICAM1 Protein Human 重组人 ICAM-1 / CD54 蛋白 (His & Fc 标签)
K氏培养基 250g 用于果汁或浓缩果汁中脂环芽孢杆菌  CADM3重组大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (His 标签) Protein
EEM培养基 EEM medium 250 用于致病性大肠杆菌的增菌培养和肠杆菌的增菌培养(Japan方法)  H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin 0.5mgH1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin) 流感病毒A抗原
Aliz-gal琼脂l/瓶用于大肠菌群快速检测incubationmediaAliz-gal琼脂l/瓶用于大肠菌群快速检测  TNFSF13B重组人 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋白 Protein
平板计数琼脂平板(9cm) 10个/包 国际标准平板计数琼脂，含糖，用于细菌总数的测定  CXCL5 Protein Human 重组人 CXCL5 蛋白
BrainHeartInfusionBroth  UCHL3 Protein Mouse 重组小鼠 UCHL3 / UCH-L3 蛋白 (His 标签)
K氏培养基 250g 用于果汁或浓缩果汁中脂环芽孢杆菌  TNFRSF19重组小鼠 TNFRSF19 / TROY 蛋白 (His 标签) Protein
胰酪胨大豆羊血琼脂基础 Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 250 用于蜡样芽孢杆菌的溶血测试验(SN标准)  Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽 Recombinant Human IGFBP30.5mgCaspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(多肽)
鸡毒支原体疫苗培养基l/袋incubationmedia鸡毒支原体疫苗培养基l/袋  RSPO2重组人 FTLS / RSPO2 蛋白 (186 Leu/Pro, Fc 标签) Protein
ModifiedLaurylSulfateTryptoseBroth-VancomycinMedium  CXCL9 Protein Human 重组人 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白
MFC培养基28950250g用于水中粪大肠菌群的滤膜法测定(GB/T5057.06)。  IL7R Protein Rat 重组大鼠 IL7R / IL7RA 蛋白 (His 标签)