Recombinant Human HGD

● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2214	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-445
分子量	48.8 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：2-dioxygenase, AKU, FLJ94126, hgd, HGD_HUMAN, HGO, Homogentisate 1, Homogentisate 1 2 dioxygenase, Homogentisate oxidase, Homogentisate oxygenase, Homogentisic acid oxidase, Homogentisicase  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
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布氏肉汤 250g 用于空肠弯曲菌培养及运动性观察。(GB、ISO)  T7 tag(recombinant T7-tagged proteins 0.5mgT7 tag(recombinant T7-tagged proteins) T7 tag标签抗原
营养琼脂(NA)300ml/袋*计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)  FCGR1重组人 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His 标签) Protein
液体硫乙醇酸盐培养基(FT) 250g 用于产气荚膜梭菌确证试验的细菌培养  G6B Protein Human 重组人 G6B / C6ORF25 蛋白 (Fc 标签)
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R2A 琼脂 250(g) incubation media R2A 琼脂 250(g)  HA重组甲型流感 H5N1 (A/Xinjiang/1/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein
赖氨酸吲哚动力培养基 LIM Medium 250克 用于链球菌的分离培养;细菌的赖氨酸、吲哚和动力复合生化试验  RGS2 peptide G蛋白信号转导调节因子2抗原 0.5mgRGS2 peptide G蛋白信号转导调节因子2抗原
改良Camp-BAP氏琼脂基础250用于弯曲杆菌选择性分离培养(GB标准)incubationmedia改良Camp-BAP氏琼脂基础250用于弯曲杆菌选择性分离培养(GB标准)  REG3G重组人 REG3G / PAP1B 蛋白 (His 标签) Protein
TrypticSoyAgar  GABARAP Protein Human 重组人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 标签)
改良V-P培养基250g用于蜡样芽孢杆菌的V-P试验  CSF3R Protein Human 重组人 G-CSFR / CD114 / CSF3R 蛋白
R2A琼脂 R2A Agar 用于饮用水中细菌总数测定(USP、EP方法)  CD2重组食蟹猴 CD2 蛋白 (Fc 标签) Protein
抗生素检定培养基8号 Antibiotic Agar No.8 250 用于去甲万古霉素等的效价测定  IKI3 family protein 0.5mgIKI3 family protein
肠球菌肉汤250g/瓶用于肠球菌选择性菌incubationmedia肠球菌肉汤250g/瓶用于肠球菌选择性菌  IRAK4重组人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白 (His 标签) Protein
胰酪胨大豆多粘菌素肉汤 10ml/支*20 用于蜡样芽孢杆菌的MPN值测定  GABARAPL1 Protein Human 重组人 ATG8 / GABARAPL1 蛋白 (His 标签)
弗拉特氏菌培养基250g用于弗拉特氏菌平板计数  LIF Protein Mouse 重组小鼠 LIF 蛋白 (Fc 标签)
R2A琼脂 低营养培养基，用于水检测中分离生长缓慢的“贫营养”的细菌和对营养要求较低的细菌 500g incubation media R2A琼脂 低营养培养基，用于水检测中分离生长缓慢的“贫营养”的细菌和对营养要求较低的细菌 500g  CD83重组食蟹猴 CD83 蛋白 (Fc 标签) Protein
Recombinant Human HGD短密青霉 产0酸二脂酶 支/瓶  MAGE-1 黑色素瘤相关 0.5mgMAGE-1 黑色素瘤相关
麦康凯琼脂平板(9cm)用于肠道致病菌的选择性分离、培养  IL21重组人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白 Protein
YGC琼脂 250g 用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分离培养(ISO方法)  GABARAPL2 Protein Human 重组人 GATE-16 / GABARAPL2 蛋白 (His 标签)
阪崎肠杆菌显色培养基CRM006l供婴儿奶粉以及其它食品中阪崎肠杆菌的鉴定和计数  ITK Protein Mouse 重组小鼠 ITK Kinase 蛋白 (aa 351-619, His & GST 标签)