Recombinant Human ERCC1

● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB1901	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-273
分子量	29.9 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：COFS 4, COFS4, DNA excision repair protein ERCC 1, DNA excision repair protein ERCC-1, DNA excision repair protein ERCC1, ERCC 1, ERCC1, ERCC1_HUMAN, Excision repair cross complementation group 1, Excision repair cross complementing 1, Excision Repair Cross Complementing Rodent Repair Deficiency Complementation Group 1, Excision repair protein, RAD 10, RAD10, UV 20, UV20  纯度 Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
强化梭菌鉴别琼脂(DRCA) Differentia Reinforced Clostridial Agar 用于食品和其它物质中梭菌的计数和培养(MERCK方法)  MAP2K6重组人 MKK6 / MEK6 / MAP2K6 蛋白 (207 Asp, 211 Asp) Protein
胰酶大豆琼脂 TSA 250克 用于生物制品的无菌试验  Smad4(Mothers against decapentaplegic homolog 4 0.5mgSmad4(Mothers against decapentaplegic homolog 4) Smad4抗原
乳糖蛋白胨培养液用于饮用水，水源水中总大肠菌群的测定(GB标准)incubationmedia乳糖蛋白胨培养液用于饮用水，水源水中总大肠菌群的测定(GB标准)  SERPINA3重组人 SerpinA3 / AACT 蛋白 (His 标签) Protein
TMP琼脂培养基 250g 用于球菌的分离培养  RNF43 Protein Human 重组人 RNF43 蛋白 (Fc 标签)
m-GREENYEASTandFUNGIBROTH  NCR3 Protein Human 重组人 NCR3 / NKp300 蛋白 (His & Fc 标签)
强化梭菌培养基 250(g) incubation media 强化梭菌培养基 250(g)  MAP2K6重组人 MKK6 / MEK6 / MAP2K6 蛋白 Protein
革兰氏染液(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)/Gram Stain Solution(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ) Gram Stain Solution(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ) 50毫升×4 细菌革兰氏染色  Smad7(Mothers against decapentaplegic homolog 7 0.5mgSmad7(Mothers against decapentaplegic homolog 7) Smad 7(多肽)
TSN琼脂250用于产气荚膜梭菌的平板计数(Merck方法)incubationmediaTSN琼脂250用于产气荚膜梭菌的平板计数(Merck方法)  CD200R1重组人 CD200R1 / CD200R 蛋白 (His 标签) Protein
3%氯胰蛋白胨大豆琼脂 250g 用于副溶血性弧菌的化培养和血清学试验时增菌培养(GB标准)  RNF43 Protein Human 重组人 RNF43 蛋白 (His 标签)
MFC琼脂250g用于大肠菌群的滤膜法检测  NOG Protein Human 重组人 Noggin / NOG 蛋白 (Fc 标签)
强化梭菌培养基(RCM) Reinforced Clostridium Medium 用于梭菌的分离培养  CD2重组食蟹猴 CD2 蛋白 (His 标签) Protein
碱性蛋白胨水 AP 250克 增殖菌及付菌  IFN- Beta (Interferon Beta 0.5mgIFN- Beta (Interferon Beta) human 干扰素-β抗原
哥伦比亚血琼脂基础250营养非常丰富，用各种细菌的基础培养基(AFNOREPIDF标准)incubationmedia哥伦比亚血琼脂基础250营养非常丰富，用各种细菌的基础培养基(AFNOREPIDF标准)  SERPINA12重组人 Vaspin / SerpinA12 蛋白 (His 标签) Protein
(脑)心浸液琼脂 250g 本产品主要用于培养营养要求高的细菌，是一款营养极其丰富的培养基。  ROBO2 Protein Human 重组人 ROBO2 蛋白 (His 标签)
E.ColiBroth  SDC4 Protein Mouse 重组小鼠 Syndecan-4 / SDC4 蛋白 (His 标签)
强化梭菌琼脂 Reinforced Clostridium Agar 用于梭菌的分离培养  IL2RG重组小鼠 IL2RG / CD132 蛋白 (His 标签) Protein
胰胨大豆琼脂斜面 Tryptic Soy Agar 250克 培养副溶血性弧菌，做细胞色素氧化酶实验  AIF　(Apoptosis-Inducing Factor 0.5mgAIF　(Apoptosis-Inducing Factor) 调亡诱导因子(多肽片断抗原)
Cary-Blair氏运送培养基250用于运送肠道致病菌标本incubationmediaCary-Blair氏运送培养基250用于运送肠道致病菌标本  IFI30重组人 IFI30 蛋白 (His 标签) Protein
TMPAgar  ROBO4 Protein Human 重组人 ROBO4 蛋白 (His 标签)
MartinBroth,Modified  CD24 Protein Rat 重组大鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白 (Fc 标签)
庆大霉素琼脂 250(g) incubation media 庆大霉素琼脂 250(g)  LTF重组小鼠 Lactotransferrin / LTF 蛋白 (His 标签) Protein
蜡样芽孢杆菌计数显色培养基 蜡样芽孢杆菌计数显色培养基 250克 蜡样芽孢杆菌快速显色分离培养  丙氨酸氨肽酶(AAP)重组蛋白 Recombinant Alanine Aminopeptidase (AAP)
Recombinant Human ERCC1血液增菌培养基250用于从血液中分离病原菌incubationmedia血液增菌培养基250用于从血液中分离病原菌  PAX8重组人 PAX8 蛋白 (His 标签) Protein
V-PMedium,Modified  ROBO4 Protein Human 重组人 ROBO4 蛋白 (His 标签)
乳酸杆菌选择性琼脂250g用于乳酸杆菌检测和分离培养  IFNA8 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (Fc 标签)