Recombinant Human EIF5A

商品属性：

货号	XG-DB1877	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-154
分子量	37.4 KDa	标签	N-terminal His-IF2DI Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：eIF4D; eIF-4D; eIF5A; EIF-5A; EIF5A1; eIF-5A1; eIF-5A-1; eIF5AI; Eukaryotic initiation factor 5A isoform 1; eukaryotic initiation factor 5A; eukaryotic translation initiation factor 5A; eukaryotic translation initiation factor 5A-1; MGC104255; MGC99547; Rev-binding Factor  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
乳糖蛋白胨培养液 Lactose Peptone Broth 用于饮用水，水源水中总大肠菌群的测定(GB标准)  VDR重组小鼠 VDR / NR1I1 蛋白 (His 标签) Protein
AC肉汤 AC Broth 250 用于常见微生物增菌培养和不含防腐剂样品的无菌试验(Alpha Biosciences方法)  抵抗素样蛋白β(RETNLβ)重组蛋白 Recombinant Resistin Like Beta (RETNLb)
叠血琼脂基础250g/瓶添加5%脱纤维羊血，用于链球菌和葡萄球菌分离和溶血试验incubationmedia叠血琼脂基础250g/瓶添加5%脱纤维羊血，用于链球菌和葡萄球菌分离和溶血试验  PSME1重组人 PA28A / PSME1 蛋白 (His 标签) Protein
4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷(MUG) 0.1g 0.01g添加于100mlHB0146(LST-MUG)中，用于O157鉴定  S100A8 Protein Human 重组人 S100A8 / CAGA 蛋白 (His 标签)
TrypticaseSoySheepBloodAgarBase  IFNA4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Interferon alpha-4 蛋白 (Fc 标签)
乳糖复发酵培养基 Lactose Broth 用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准)  CTSL1重组小鼠 Cathepsin L / CTSL 蛋白 (His 标签) Protein
MUG培养基 MUG Medium 100 用于大肠杆菌测定  5-HTR2A 5-羟色胺受体2A抗原 0.5mg5-HTR2A 5-羟色胺受体2A抗原
牛心汤琼脂250g/瓶用于绵羊血琼脂平板制备incubationmedia牛心汤琼脂250g/瓶用于绵羊血琼脂平板制备  VTCN1重组人 B7-H4 / B7S1 / B7x 蛋白 (Fc 标签) Protein
大肠杆菌O157检验培养基  S100A8 Protein Human 重组人 S100A8 / CAGA 蛋白 (His 标签)
沙氏葡萄糖琼脂250g用于化妆品中白色念球菌分离培养  NINJ1 Protein Rat 重组大鼠 Ninjurin-1 / NINJ1 蛋白 (Fc 标签)
乳糖复发酵培养基(乳糖发酵培养基) 1000(g) incubation media 乳糖复发酵培养基(乳糖发酵培养基) 1000(g)  LXN重组人 Latexin / LXN / TCI 蛋白 (Fc 标签) Protein
TCBS琼脂 TCBS Agar 250克 用于霍乱、副溶弧菌的分离培养  肽酶抑制因子16(PI16)重组蛋白 Recombinant Peptidase Inhibitor 16 (PI16)
培养基250用于试验incubationmedia培养基250用于试验  G6B重组人 G6B / C6ORF25 蛋白 (Fc 标签) Protein
MIO培养基 250g 用于动力、吲哚和鸟氨酸试验(FDA方法)  S100A9 Protein Human 重组人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白
KingMediumA  HA Protein H11N9 重组甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
乳糖复发酵培养基(乳糖发酵培养基) 250(g) incubation media 乳糖复发酵培养基(乳糖发酵培养基) 250(g)  IL18BP重组人 IL18BPa 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
玉米粉琼脂 Corn Meat Medium 250克 真菌检测;霉菌产毒培养  双解丝蛋白1(TWF1)重组蛋白 Recombinant Twinfilin 1 (TWF1)
动力-吲哚-尿素培养基基础250用于细菌的复合生化试验incubationmedia动力-吲哚-尿素培养基基础250用于细菌的复合生化试验  RAB31重组人 RAB31 / Rab22B 蛋白 (His 标签) Protein
改良BPLS琼脂 250g 用于各种标本中沙门氏菌选择性分离培养(ISO标准)  S100A9 Protein Human 重组人 S100A9 / CAGB / p14 蛋白 (His 标签)
含225mL胰酪胨大豆多粘菌素肉汤均质袋用于蜡样芽孢杆菌的检测  HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Hong kong/213/03) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (28 Ser/Trp, His 标签)
乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂 LMG Agar 用于滤膜MUG法检测食品中大肠菌群数(SN/T1059.2)  CD274重组小鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
Recombinant Human EIF5A血琼脂基础2号 Blood Agar Base N0.2 250 供分离营养要求非常高的致病菌用，后加血液制成血平板  Clenbuterol Hydrochloride/KLH
马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基250g/瓶用于霉菌和酵母菌计数incubationmedia马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基250g/瓶用于霉菌和酵母菌计数  EED重组人 EED / Embryonic Ectoderm Development 蛋白 (His & GST 标签) Protein
山梨醇麦康凯琼脂基础(SMAC) 250g 用于大肠杆菌O157的分离培养  S100B Protein Human 重组人 S100B 蛋白 (His 标签)
HE琼脂培养基23080250g用于沙门氏菌和某些志贺氏菌的选择性分离培养(GB/T4789.28-2003中4.22,GB/T4789.4-2003和SN...  CD200 Protein Mouse 重组小鼠 CD200 蛋白 (His 标签)
重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：