检测实验丨流式细胞术检测细胞周期

流式细胞术检测细胞周期

一、原理：

细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期（G1期、S期、G2期）与分裂期（M期）。

流式细胞术检测细胞周期的原理基于DNA含量在细胞周期不同阶段的变化。DNA染料（如碘化丙啶PI）能够与DNA结合，不同时期的细胞由于DNA含量不同，结合的荧光染料量也不同，因此流式细胞仪检测的荧光强度能够反映细胞的DNA含量，进而判断细胞所处的周期阶段。

二、材料与仪器：

实验试剂：

胰蛋白酶溶液、PBS（磷酸盐缓冲液）、RNA酶、PI（碘化丙啶）染液、70%乙醇溶液

实验仪器：

流式细胞仪、离心机、CO2培养箱、生物安全柜、显微镜、移液器、离心管、细胞培养板、滤网

三、实验步骤：

1、细胞准备：

按照实验要求进行细胞铺板，待细胞长到需要的密度后收集细胞。离心去除培养基，用预冷的PBS洗涤细胞。

2、细胞固定：

将细胞悬液加入预冷的70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃固定至少4小时。离心去除乙醇，用预冷的PBS洗涤细胞。

3、细胞染色：

配置PI染料，按样本量加入适量的PI染液和RNase A。避光条件下，将PI染液与细胞悬液混合，37℃孵育30分钟。

4、流式细胞仪检测：

将染色后的细胞悬液过滤到流式管内，上机检测。使用流式细胞仪进行检测，记录并分析数据。

※实验结果示例：

细胞周期

四、注意事项

1、细胞培养：

确保细胞在对数生长期，避免细胞量过少或过多导致的实验误差。培养环境需保持无菌，并调整合适的温度、湿度和酸碱度。

2、细胞收集与固定：

收集细胞时应尽量多收集，以避免细胞量不足。固定细胞时，先用预冷的PBS重悬细胞，再逐滴滴入无水乙醇中，不可颠倒顺序。

3、细胞染色：

染料配置和染色过程应在避光条件下进行，防止荧光染料降解。PI等染料不能透过完整的细胞膜，需要用乙醇固定并通透细胞膜。