大鼠动物髓核细胞的原代培养

大鼠动物髓核细胞的原代培养方法

颈椎脱臼法处死SD大鼠。

 剃去背毛，75%酒精浸泡5min。

从尾椎处剪开皮肤，取出腰椎。

尽量剔除附着的肌肉，用含2%双抗的PBS冲洗3-5次。

分离椎节，切开纤维环分离凝胶状髓核，将凝胶状髓核置于PBS中冲洗 3 次，去除血迹，剪碎髓核组织呈 1mm³大小，移至离心管后加入5倍体积的1.5%Ⅱ型胶原酶，37℃摇床消化2h。

消化结束 ，20%FBS终止消化，100um滤网过滤，1000r/min 离心 5min，弃上清后DMEM/F12 重悬，按 1×10⁵/ml接种于培养板，加入含1%双抗和 15% FBS 的 DMEM/F12，置于37 ℃细胞培养箱中培养。

4 d后换液，以后每3天换 液 1 次，细胞达 90% 融合后传代。

大鼠动物髓核细胞的原代培养评价

原代细胞(primary cell)：是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。