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文献和实验大鼠动物髓核细胞的原代培养方法
颈椎脱臼法处死SD大鼠。
剃去背毛，75%酒精浸泡5min。
从尾椎处剪开皮肤，取出腰椎。
尽量剔除附着的肌肉，用含2%双抗的PBS冲洗3-5次。
分离椎节，切开纤维环分离凝胶状髓核，将凝胶状髓核置于PBS中冲洗 3 次，去除血迹，剪碎髓核组织呈 1mm3大小，移至离心管后加入5倍体积的1.5%Ⅱ型胶原酶，37℃摇床消化2h。
消化结束 ，20%FBS终止消化，100um滤网过滤，1000r/min 离心 5min，弃上清后DMEM/F12 重悬，按 1×105/ml接种于培养板，加入含1%双抗和 15% FBS 的 DMEM/F12，置于37 ℃细胞培养箱中培养。
4 d后换液，以后每3天换 液 1 次，细胞达 90% 融合后传代。
大鼠动物髓核细胞的原代培养评价
原代细胞(primary cell)：是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。
的[5]，但细胞得率均较低，而近些年来国外大多数方法采用以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养[6~9,11,12]。由于原代培养中无法避免地混杂成纤维细胞、周细胞、平滑肌细胞、星型胶质细胞等其他细胞的生长，而且工作量大、过程繁琐且费用高[1]，进行较纯的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养一直是国内外的一个难点。 本人参照文献[6]、[7]、[8]的方法，成功地摸索出大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法，并获得纯度较高的脑微血管内皮细胞。 1.材料与方法 1.1 实验动物 每次
(处理) 和 Restraint (限制) 才能安全顺利的进行。Handling 的定义为通过我们的手直接或间接，触碰动物或者不触碰动物来操作大鼠或者小鼠。Handling 方法会因动物而不同，需要冷静且坚定方式，避免伤害小鼠，尽可能创造一个安全的实验条件和环境。Restraint 的定义为通过手或者借助物理装置固定大鼠或者小鼠，使其整个身体或者部分身体处于一种舒适和安全的状态。Restraint 措施对于进行实验工作是必不可少的，它们有助于避免动物受伤，并为动物处理者提供足够的安全。舒服
液体配制：硼酸硼砂缓冲液：0.05M四硼化钠45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4；胰酶－EDTA消化液：胰酶－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡盐液定容至100ml所用的培养板、培养瓶或玻片预先经100μg/L多聚赖氨酸硼酸盐缓冲液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干备用。操作步骤如下：1、孕16d SD大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks平衡盐液中。2、在解剖显微镜下分离并取出胚胎
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