转印棉(白）

Western 实验步骤

样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解

胶体电泳法方法步骤

立刻产生无数细微气泡，是通电的特征。10） 追踪染料很快进入胶体，开始焦集成蓝色细线，并向下泳动，大约1 h 可泳动到底边，中止电泳，除去电源盖。有些分子量较大的样本，或使用浓度较高的胶片，可以等到蓝色细线泳出胶体才停止。胶片染色法：11） 取出胶片组合，使玻璃板向上，先除去两侧间隔条，再以扁形药匙轻轻撬起玻璃，胶片则留在白板上。切除焦集胶体，并在分离胶片的右上方截角做记号 （区别胶片的左右）。12） 取染色盘 （大约比胶片稍大），倒入CBR染色液，在染色盘上方把上述白板倒翻过来，挑起胶片一角

western-blot实验方法

缓冲液的铝盒中。 （6）SDS-PAGE 结束后，小心地剥下两块凝胶，一块用于考马斯亮兰染色观察电泳情况，另一块浸泡在转膜缓冲液中预平衡。海绵垫、滤纸、PVDF 膜及凝胶的预平衡时间在15 min - 1 hr 之间。 （7）将转膜夹子打开，使黑的一面保持水平。按照海绵垫、滤纸、凝胶、膜、滤纸和海绵垫的先后顺序铺垫，制备凝胶转移夹层。将膜与凝胶对齐。用玻璃棒赶走气泡。 （8）将夹子夹起来，扣紧，小心不要移动内层。放入电转槽中。使夹子的黑面对槽的黑面，夹子的白面对槽的红面。 （9）将电转槽放在冰水盒