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文献和实验童鞋们都知道,要想成为真正的 PCR 达人,并非易事。一个小小的环节都可能让整个实验挂掉,也正是因此,PCR 成为了资深科研者们心中的痛。 不要说实验本身,其实就连实验的耗材都隐藏着大学问,工欲善其事,必先利其器。 今天我们就具体来说下 PCR 耗材中选择选择反应板的问题。 PCR 板通常采用 96 孔和 384 孔的形式,其次为 24 孔和 48 孔。使用的 PCR 仪和正在进行的应用的性质将决定 PCR 板是否适合您的实验。 裙边 PCR 板的“裙”是板周围的板。裙边可为反应体系构建时
最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.配制MTT时用用PBS溶解,也有人用生理盐水配,60℃水浴助溶。PBS配方:Nacl 8gKcl 0.2gNa2HPO4 1.44gKH2PO4 0.24g调ph 7.4定容1L关于细胞的接种(铺板)细胞过了30代以后就不要用了,因为状态不好了;培养板要用好的(最好进口板),不好的板或重复利用的板只可做预实验。接种时最好按照预实验摸索出的密度
培养基中,37℃振摇过夜。 (2)接种25ml过夜培养物于500ml LB培养基,37℃振摇,至OD600 达到0.4. (3)迅速将培养物置于冰浴中30min,至充分冷却。 (4)将菌液转移至预冷的离心管中,4℃下以2500r/min离心15 min,弃培养液,回收细胞。 (5)以10ml预冷的10%甘油洗涤沉淀,低温离心,共两次。 (6)加约1ml(适量)预冷的10%甘油重悬沉淀,稀释悬液100倍,测量OD600,至稀释浓度为2-3×1010个细胞/ ml (1.0 OD600约
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