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MCK-Cre小鼠是一种在肌酸激酶M型(Muscle Creatine Kinase, MCK)基因启动子下驱动Cre重组酶表达的转基因小鼠模型。MCK是一种在骨骼肌和心肌中高表达的酶,参与能量代谢。因此,MCK-Cre小鼠主要用于研究这些组织中的基因功能。
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MCK的功能:
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能量代谢: MCK在肌肉组织中参与ATP和磷酸肌酸之间的能量转移,是肌肉收缩过程中能量供应的重要调控因子。
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组织特异性表达: MCK主要在骨骼肌和心肌中表达,使得MCK-Cre小鼠适用于研究这些组织中的特定基因功能。
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Cre/loxP系统的应用:
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Cre重组酶: 一种能够特异性识别loxP位点并介导基因重组的酶,用于实现基因的条件性敲除或激活。
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条件性基因敲除/激活: 通过MCK-Cre小鼠与携带loxP位点的靶基因小鼠杂交,研究人员可以在MCK表达的骨骼肌和心肌中特异性敲除或激活目标基因,研究其功能。
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研究应用:
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肌肉生物学研究: MCK-Cre小鼠用于研究骨骼肌和心肌的发育、功能和疾病机制。
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心脏功能研究: 研究MCK在心肌中的作用,特别是在心肌能量代谢、收缩功能和相关疾病中的作用。
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肌肉疾病研究: 通过条件性敲除或激活特定基因,研究这些基因在肌肉发育和功能中的作用,揭示肌肉疾病(如肌营养不良、肌萎缩症等)的病理机制。
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代谢研究: 研究MCK在能量代谢和肌肉适应性中的作用,特别是在运动和代谢疾病中的功能。
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操作方法:
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基因敲除/激活实验: 将MCK-Cre小鼠与携带loxP位点的靶基因小鼠杂交,生成条件性敲除或激活的后代。通过分析这些小鼠的表型,研究特定基因在骨骼肌和心肌中的功能。
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表型分析: 通过组织学、分子生物学和生理学方法,分析MCK-Cre小鼠在特定细胞类型和组织中的具体表现。
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表型和观察结果:
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MCK表达细胞标记: 结合Cre/loxP系统,MCK-Cre小鼠可以特异性地在骨骼肌和心肌中实现目标基因的条件性敲除或激活,研究这些细胞在发育和功能中的作用。
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细胞分化和功能研究: 研究MCK表达细胞在肌肉和心脏发育中的分布和行为,揭示其在细胞分化和功能维持中的关键角色。
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疾病模型:
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肌肉疾病研究: 研究MCK在肌肉疾病中的作用,探索相关的遗传机制和潜在治疗方法。
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心脏疾病研究: 研究MCK在心脏疾病中的作用,揭示其在心肌能量代谢和功能异常中的调控机制。
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代谢疾病研究: 研究MCK在代谢疾病中的作用,探讨其在能量代谢失调和相关疾病中的潜在机制。
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文献和实验家族。当 KRAS 基因发生异常时,下游信号传导失调导致肿瘤发生,KRAS 突变也是中国 NSCLC 的患者第二大常见的基因突变,其中 KRAS G12C 在肺腺癌中最为常见。 目前 NSCLC 的小鼠模型主要集中在腺癌亚型上,大多数的研究采用条件性 KRAS 点突变模型进行,在 KRAS-LSL-G12C 或 KRAS-LSL-G12D 小鼠细胞中引入 Cre 重组酶导致内源性水平上突变等位基因的表达,模拟人类肿瘤发展的启动条件。Jackson 等[2] 就采用了这样的方式构建肿瘤模型,他们在 KRASG12
。随后,才能进行杂合子小鼠的相互交配。注意点:-不同的 KO Founder 之间不能相互交配。-不同的 KO Founder 的子代之间也不建议相互交配。条件性基因敲除获得 flox 纯合同时 Cre 阳性的小鼠(f/+;Cre-)×(f/+;Cre+)→ f/f;Cre+Flox 小鼠在去除 Neo 基因以后(CRISPR/Cas9 途径获得的 CKO 小鼠省略此步骤),获得仅含有两个 loxP 位点的 flox 杂合子小鼠(flox/+,可缩写成 f/+)。 flox 杂合子(f/+)小鼠与组织
,会采用两种转基因动物进行杂交,即一种带Cre的转基因动物和一种带loxP序列的转基因动物进行交配,使得后代既带Cre又带loxP基因,然后Cre重组酶会识别loxP位点,导致基因重组(图2)。由于Cre基因的表达受上游启动子的调控,这样启动子的时空特异性就决定了基因重组的时空特异性。虽然该方法可以实现高效、特异的基因重组,但是以下不足限制了用转基因动物进行基因操作的发展: 1) 转基因动物的难以获得:目前虽然已经有一些Cre和loxP转基因动物,但是要获得这些转基因小鼠比较困难,特别
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