Recombinant Human VPS29

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB3809	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-182
分子量	19.9 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：DC15, DC7, DKFZp564F0223, FLJ20492, hVPS29, PEP11, PEP11 homolog, Retromer protein, Vacuolar protein sorting 29, Vacuolar protein sorting 29 (yeast homolog), Vacuolar protein sorting 29 (yeast), Vacuolar protein sorting 29 homolog, Vacuolar protein sorting 29 homolog (S. cerevisiae), Vacuolar protein sorting associated protein 29, Vacuolar protein sorting-associated protein 29  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
公司正在出售的产品：
大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装    NEK7 Protein Human 重组人 NEK7 蛋白 (His & GST 标签)
大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装    KIT重组人 KIT / c-KIT / CD117 蛋白 (Fc 标签) Protein
大鼠尿微量白蛋白（ALB）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装    PLA2G1B Protein Mouse 重组小鼠 PLA2G1B / Phospholipase-A2 蛋白 (His 标签)
大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T    GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein 0.5mgGFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 胶质纤维酸性蛋白(抗原)
大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T    CD47重组大鼠 CD47 蛋白 (Fc 标签) Protein
大鼠血栓前体蛋白(TpP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T    BPI Protein Human 重组人 BPI 蛋白 (His 标签)
大鼠抑制素B(INH-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T    STK16重组人 STK16 / PKL12 / MPSK 蛋白 (His & NusA 标签) Protein
大鼠尿微量白蛋白   英文名称：   Rat Microalbunminuria      英文缩写：   MAU    EGFR Protein Canine 重组狗 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (His 标签)
Recombinant Human VPS29大鼠有丝分裂原活化蛋白激酶   英文名称：   Rat Mitogen Activated Protein kinase      英文缩写：   MAPK    骨成型蛋白受体1B(BMPR1B)重组蛋白 Recombinant Bone Morphogenetic Protein Receptor 1B (BMPR1B)
大鼠胃动素   英文名称：   Rat Motilin      英文缩写：   MTL    IL5RA重组小鼠 IL5Ra / CD125 蛋白 (His 标签) Protein
大鼠成肌分化蛋白   英文名称：   Rat Myogenic Differeiation      英文缩写：   MyoD    NLGN3 Protein Human 重组人 Neuroligin-3 / NLGN3 蛋白 (His 标签)
大鼠尿酸   英文名称：   uric acid      英文缩写：   UA    CHN1重组人 CHN1 / Chimerin 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein
大鼠血管内皮生长因子   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor      英文缩写：   VEGF    IL12A & IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白
​​​​​​​重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。  ​​​​​​