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文献和实验细胞悬浮液; 6孔平底组织培养板,或φ60 mm培养皿; 18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的盖玻片; 含血清培养基(通常为 RMPI 1640,含10% 小牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素); 超净工作台; CO2孵箱; 盖片镊; 操作步骤: 1、用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2、将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3、在距离紫外灯直射范围
计算出底物消耗速度或产物生成速度,将速度换算为μmol/min即是以国际单位表示的酶活性。 例如: 假设某一样品种的酶活性记为X U/L,取样品量VS(mL)与底物缓冲液Vr(mL)孵育,t min后加入终止液Ve(mL),检测到的净吸光度增加为A,该产物的摩尔消光系数为ε(一般可通过带标准求得),比色皿光径为 b cm。③ 连续监测法计算 酶与底物在特定条件下孵育,每隔一定时间(2-60 s)连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化,从而计算出每分钟的信号变化速率。连续监测法
Obtaining Embryos: hCG Injection
Ovulation is induced in X. tropicalis by injection of human chorionic gonadotropin (hCG). X. tropicalis requires a much smaller dose than does X. laevis. We use basically the same protocol as that described on the Grainger site .
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